Mutagenesis Gen LipY dari Mycobacterium tuberculosis Menggunakan Overlap Extension PCR dan Konstruksi Konstruksi Vektor Ekspresi pRHA-Lip

Halim, Christina Ekawati and Tunjung Mahatmanto, STP., M.Si., Ph.D and Dr.rer.nat. Wien Kusharyoto, - (2020) Mutagenesis Gen LipY dari Mycobacterium tuberculosis Menggunakan Overlap Extension PCR dan Konstruksi Konstruksi Vektor Ekspresi pRHA-Lip. Sarjana thesis, Universitas Brawijaya.

Abstract

Tuberkulosis (TB) merupakan salah satu penyakit infeksi yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis dan memiliki tingkat kematian tinggi. Infeksi TB mudah ditularkan, dan dapat menyebabkan penyakit pada populasi yang memiliki sistem imun yang lemah. Selain menyebabkan penyakit, TB dapat bersifat laten dan tidak menyebabkan penyakit. TB laten memiliki peluang menyebabkan penyakit sebesar 5-15%. Kondisi yang ada diperburuk dengan munculnya galur (strain) baru M. tuberculosis yang resisten terhadap antibiotik. Hal tersebut menjadikan penelitian mengenai obat-obatan dan vaksin yang baru terhadap TB penting. LipY merupakan salah satu jenis enzim lipase yang dihasilkan oleh M. tuberculosis. LipY memiliki aktivitas hidrolisis lemak yang tinggi dan spesifik. LipY juga diduga memiliki peran penting dalam virulensi dari M. tuberculosis. Selain itu, LipY memberikan reaksi imun dari sistem imun inang. Hal tersebut menjadikan LipY potensial untuk diteliti sebagai upaya pengembangan vaksin baru terhadap infeksi TB. Gen LipY asli yang didapat dari M. tuberculosis memiliki situs restriksi enzim XhoI di tengah-tengah sekuennya. Hal tersebut menjadi hambatan dalam proses kloning gen pada vektor ekspresi pRHA. Sehingga dibutuhkan proses mutagenesis untuk menghilangkan situs restriksi tersebut. Mutagenesis dilakukan menggunakan overlap extension PCR, sedangkan konstruksi vektor ekspresi menggunakan restriksi-ligasi. Vektor pRHA digunakan karena dapat mempertahankan insert, serta ekspresi protein dapat dikendalikan melalui induksi dan represi ekspresi. Keberhasilan mutagenesis dan konstruksi vektor ekspresi dipastikan menggunakan analisis elektroforesis agarosa, analisis restriksi, dan sekuensing DNA. Hasil penelitian menunjukkan situs restriksi enzim XhoI berhasil dihilangkan menggunakan metode overlap extension PCR. Konstruksi vektor ekspresi pRHA- LipY-XhoI(del) juga berhasil dilakukan. Hasil konstruksi pada vektor ekspresi kemudian dapat digunakan dalam ekspresi protein untuk produksi dan penelitian terkait LipY

English Abstract

Tuberculosis (TB) is an infectious disease that has a high mortality rate. TB infection is easily transmitted, and can cause disease in populations that have a weak immune system. Apart from causing disease, TB can be latent and not cause disease. Latent TB has a 5-15% chance of causing the disease. Existing conditions are exacerbated by the emergence of new TB strains that are resistant to antibiotics. That makes research on new drugs and vaccines important. LipY is a type of lipase enzyme produced by Mycobacterium tuberculosis. LipY has high and specific fat hydrolysis activity. LipY is also thought to have an important role in the virulence of M. tuberculosis. In addition, LipY provides an immune reaction from the host immune system. This makes LipY a potential study as an effort to develop a new vaccine against TB infection. The LipY gene naturally obtained from M. tuberculosis has a XhoI enzyme restriction site within the sequence. This problem can hinder the process of gene cloning in pRHA expression vectors. Therfore mutagenesis process is needed to eliminate the restriction site. Mutagenesis performed using overlap extension PCR, while the expression vector construction uses restriction-ligation. The pRHA vector is used because it can maintain the insert, and protein expression can be controlled through induction and repression system of expression. The success of mutagenesis and the construction of expression vectors is ensured using agarose electrophoresis analysis, restriction analysis, and DNA sequencing. The results showed that the XhoI enzyme restriction site was successfully removed using the overlap PCR extension method. The construction of the pRHA-LipY-XhoI(del) expression vector was also successfully carried out. The results of the construction on the expression vector can then be used in protein expression for LipY related production and research

Item Type:	Thesis (Sarjana)
Identification Number:	0520100064
Uncontrolled Keywords:	Tuberkulosis, Mutagenesis, LipY, Overlap Extension PCR, pRHA,
Subjects:	300 Social sciences > 338 Production > 338.1 Agriculture > 338.16 Production efficiency
Divisions:	Fakultas Teknologi Pertanian > Teknologi Hasil Pertanian
Depositing User:	Zainul Mustofa
Date Deposited:	06 Jul 2022 04:47
Last Modified:	17 Sep 2024 06:16
URI:	http://repository.ub.ac.id/id/eprint/191631

Text Christina Ekawati Halim.pdf Download (2MB)

Actions (login required)

View Item