Eksplorasi Efek Anti-Inflamasi Fraksi Etil Asetat Dan N-Butanol Rimpang Temu Hitam (Curcuma Aeruginosa Roxb.) Pada Sel Raw 264.7 Yang Distimulasi Lipopolisakarida: Pendekatan In Vitro Dan In Silico

Azerlyn, Defiona Rensia Naomi and Prof. Widodo, S.Si., Ph.D.Med.Sc. and Prof. Dr. Ir. Moch. Sasmito Djati, MS., IPU., ASEAN Eng (2024) Eksplorasi Efek Anti-Inflamasi Fraksi Etil Asetat Dan N-Butanol Rimpang Temu Hitam (Curcuma Aeruginosa Roxb.) Pada Sel Raw 264.7 Yang Distimulasi Lipopolisakarida: Pendekatan In Vitro Dan In Silico. Magister thesis, Universitas Brawijaya.

Abstract

Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis pengaruh pemberian fraksi etil asetat dan nbutanol rimpang temu hitam terhadap produksi NO, serta ekspresi iNOS, NF-κB, IL-1β, dan TNF- α pada lini sel RAW 264.7 yang distimulasi LPS, serta mengeksplorasi mekanisme molekuler senyawa bioaktif yang terkandung dalam ekstrak rimpang temu hitam sebagai agen anti-inflamasi secara in silico. Ekstrak etanol rimpang temu hitam difraksinasi menggunakan tiga jenis pelarut, yaitu n-heksana, etil asetat, dan n-butanol. Fraksi yang diperoleh diuji pada sel RAW 264.7 untuk mengukur kadar NO menggunakan uji Griess, sementara viabilitas sel dinilai dengan metode WST-1. Pengaruh fraksi potensial terhadap ekspresi molekul inflamasi IL-1β, TNF-α, iNOS, dan NF-κB dianalisis dengan flow cytometry. Data senyawa bioaktif ekstrak rimpang temu hitam diidentifikasi melalui data mining. Seleksi senyawa dilakukan berdasarkan bioaktivitas menggunakan PASS Online dengan nilai Pa ≥ 0.3, serta prediksi toksisitas dengan ProTox II. Senyawa terpilih dieksplorasi lebih lanjut melalui molecular docking untuk memprediksi interaksi dengan protein target, serta simulasi molecular dynamics untuk mengevaluasi stabilitas dan interaksi senyawa dengan protein target. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat dan n-butanol mampu menghambat produksi NO pada sel RAW 264.7 yang distimulasi LPS. Nilai IC50 yang diperoleh adalah 19,7 ± 1,9 µg/mL untuk FEA dan 2,5 ± 0,05 µg/mL untuk FBU. Namun, karena sitotoksisitasnya yang kuat, FBU tidak dipilih sebagai fraksi potensial dan FEA dipilih untuk analisis FCM. FEA secara signifikan dapat menurunkan ekspresi protein iNOS tetapi tidak konsisten dalam menekan ekspresi NF-κB, IL-1β, dan TNF-α. Analisis in silico mengidentifikasi dehydrochromolaenin, pyrocurzerenone, dan turmeronol B sebagai senyawa potensial, dengan dehydrochromolaenin menunjukkan kemampuan terbaik sebagai inhibitor iNOS melalui interaksi molekuler yang kuat, stabil, dan konsisten. Hasil ini menekankan bahwa ekstrak rimpang temu hitam memiliki potensi sebagai agen anti-inflamasi yang efektif melalui penghambatan produksi NO dan ekspresi iNOS.

English Abstract

This study aims to analyze the effects of ethyl acetate and n-butanol fractions from Curcuma aeruginosa rhizomes on NO production, as well as the expression of iNOS, NF-κB, IL- 1β, and TNF-α in LPS-stimulated RAW 264.7 cells, and to explore the molecular mechanisms of bioactive compounds from Curcuma aeruginosa extracts as anti-inflammatory agents using in silico methods. The ethanol extract of C. aeruginosa was fractionated using three solvents: nhexane, ethyl acetate, and n-butanol. The resulting fractions were tested on RAW 264.7 cells to measure NO levels using the Griess assay, while cell viability was assessed using the WST-1 method. The potential fraction's effect on inflammatory molecules IL-1β, TNF-α, iNOS, and NF- κB was analyzed through flow cytometry. Bioactive compounds from C. aeruginosa extracts were identified via data mining, selected based on bioactivity using PASS Online (Pa ≥ 0.3) and subjected to toxicity prediction with ProTox II. Selected compounds were further explored through molecular docking to predict interactions with target proteins and molecular dynamics simulations to evaluate the stability and interactions with these proteins. The results showed that FEA and FBU inhibited NO production in LPS-stimulated RAW 264.7 cells, with IC50 values of 19.7 ± 1.9 µg/mL for FEA and 2.5 ± 0.05 µg/mL for FBU. However, due to its strong cytotoxicity, FBU was not selected as the potential fraction, while FEA was chosen for FCM analysis. FEA significantly reduced iNOS protein expression but inconsistently inhibited NF-κB, IL-1β, and TNF-α expression. In silico analysis identified dehydrochromolaenin, pyrocurzerenone, and turmeronol B as potential compounds, with dehydrochromolaenin showing the strongest potential as an iNOS inhibitor through strong, stable, and consistent molecular interactions. These findings highlight the potential of C. aeruginosa extracts as effective anti-inflammatory agents by inhibiting NO production and iNOS expression.

Item Type:	Thesis (Magister)
Identification Number:	0424090065
Divisions:	S2/S3 > Magister Biologi, Fakultas MIPA
Depositing User:	Unnamed user with username nova
Date Deposited:	21 Jan 2025 02:20
Last Modified:	21 Jan 2025 02:20
URI:	http://repository.ub.ac.id/id/eprint/235148

Text (DALAM MASA EMBARGO) Defiona Rensia Naomi Azerlyn.pdf Restricted to Registered users only Download (5MB)

Actions (login required)

View Item