Siswanto, Budi (2005) Pengaruh subpasase dan starvasi serum fibroblas sebagai donor nukleus pada keberhasilan pertumbuhan sel rekonstruksi. Suatu upaya peningkatan efisiensi transfer nukleus sel somatik dengan teknik IDNI. Doktor thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Tujuan penelitian ini adalah untuk mempelajari pengaruh subpasase dan starvasi serum fibroblas sebagai donor nukleus pada keberhasilan perkembangan sel rekonstruksi. Metode penelitian yang digunakan adalah eksperimen laboratorium. Sel donor yang digunakan adalah fibroblas fetus kambing. Sitoplasma resipien yang digunakan adalah oosit kambing yang dilakukan maturasi in vitro pada tahap metafase II (Mil) yang telah dilakukan enukleasi (Oosit enukleasi). Penelitian dibagi menjadi dua tahap yaitu tahap pendahuluan dan tahap eksperimen. Tahap pendahuluan adalah optimalisasi prosedur Transfer nucleus sel somatic (TNS) teknik IDNI (Intracytoplasmic Direct Nuclear Injection). Tahap eksperimen terdiri dua tahap. Tahap I : Studi pengaruh subpasase (sel donor A) dan kultur starvasi serum (sel donor B) terhadap derajat apoptosis sel donor. Tahap II : Studi pengaruh derajat apoptosis sel donor terhadap perkembangan sel rekonstruksi hasil TNS dengan teknik IDNI. Penelitian tahap pendahuluan menunjukkan bahwa IDNI dapat digunakan sebagai teknik TNS, melalui integritas sel rekonstruksi, yaitu sitoplasma yang diaspirasi sebanyak 10-25%, tidak ada lisis dan tidak degenerasi. TNS menggunakan sel donor subpasase, dari 72 sel rekonstruksi yang dilakukan aktivasi terjadi 12 (16,67%) pembelahan dan menggunakan sel donor starvasi serum, dari 68 sel rekonstruksi yang dilakukan aktivasi terjadi 7 (10,29%) pembelahan Hasil penelitian tahap I menunjukkan bahwa subpasase 3 mempunyai persentase sel hidup yang masih baik (79.55 % ± 1,72), apoptosis dini 24,00 % ± 6 ,08 dan apoptosis lanjut 11,67 % ± 2,08. Kultur starvasi serum dari subpasase 3 pada hari ke 3 mempunyai persentase sel hidup yang masih baik (56.1 % ± 5.94), mengalami proses apoptosis dini 41,67 ± 2,08 dan apoptosis lanjut 42,33 % ± 7 ,57. Analisis statistik menunjukkan bahwa sistim kultur (subpasase dan starvasi serum) mempunyai asosiasi kuat dengan hidup, apoptosis dini dan apoptosis lanjut dari sel donor. Penelitian tahap II menunjukkan bahwa dari 125 sel rekonstruksi menggunakan nukleus donor sel donor A terjadi pembelahan sel sebanyak 19 (15,2%) dan terjadi pertumbuhan 4-8 sel dan morula masing-masing ada 3 (0,8%). Dari 118 sel rekonstruksi menggunakan nukleus donor sel donor B terjadi pembelahan sel sebanyak 15 (12,7 %), terjadi pertumbuhan 4-8 sel sebanyak 7 (5,93%) dan tidak ada yang mencapai morula. Analisis statistik menunjukkan bahwa derajat apoptosis sel donor (hidup, apoptosis dini dan apoptosis lanjut) mempunyai asosiasi kuat dengan perkembangan sel rekonstruksi.
English Abstract
The aims of this research are to study the influence of sub passage and serum starvation of fibroblast, as nuclear donor to successfulness of development of reconstructed cell. Research was done using laboratorial experimental design. Donor cell use goat fetal fibroblast. Cytoplasm recipient use enucleated oocyte of M-ll stage matured in vitro. Research was divided in two steps i.e. preliminary and experimental. Preliminary study was optimalization of SCNT (Somatic Cell Nuclear Transfer) using IDNI (Intracytoplasmic Direct Nuclear Injection) technique. The experimental was consisting of two steps. The first step; Studies the influence of sub passage (donor cell A) and serum starvation culture (donor cell B) to the degree of donor cell. Second step; The influence of the degree of donor cell to development of reconstructed cells produced by IDNI technique of SCNT. Preliminary step of research showed that IDNI can be used as technique of SCNT via production of integrated reconstructed cells i.e. aspirated cytoplast is 10-25 %, no lyses and no degeneration. SCNT using sub passage and serum starvation cell as nuclear donor showed that 12 (16, 67%) of 72 activated reconstructed cells and 7 (10, 29%) of 68 activated reconstructed cells have cleaved Results of first step showed that third sub passage still have good percentage of life cells (79.55 % ± 1, 72), early apoptotic was 24, 00 % ± 6, 08. and late apoptotic was 11,67 % ± 2,08. Serum starvation culture of third sub passage still have good percentage of life cells at third day (56.1 % ± 5.94), early apoptotic was 41, 67 ± 2, 08 and late apoptotic cell was 42, 33 % ± 7, 57. Statistical analysis showed that culture system (sub passage and serum starvation) has strong association with life, early apoptotic and late apoptotic donor cells. Second step of research showed that 19 (15,2%) of 125 reconstructed cells using donor cell A have cleaved and 3 (0,8%) of 125 reconstructed cells using donor cell A was growth to 4-8 cell stage and morula. There are 15 (12,7 %) of 118 reconstructed cells using donor cell B cleave. There are 7 (5, 93%) of 118 reconstructed cells using donor cell B grow to 4-8 cell stage and there are no cell grow to morula. Statistical analysis showed that the degree of apoptotic (life, early apoptotic and late apoptotic) has strong association with development rate of reconstructed cell.
| Item Type: | Thesis (Doktor) |
|---|---|
| Identification Number: | - |
| Uncontrolled Keywords: | Subpasase, starvasi serum, sel hidup, apoptosis, perkembangan.-Sub passage, serum starvation, Life cell, apoptotic, development. |
| Divisions: | S2/S3 > Doktor Ilmu Kedokteran, Fakultas Kedokteran |
| Depositing User: | soegeng sugeng |
| Date Deposited: | 30 Jul 2024 07:25 |
| Last Modified: | 30 Jul 2024 07:25 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/225880 |
![[thumbnail of BUDI SISWANTO.pdf]](http://repository.ub.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text
BUDI SISWANTO.pdf Download (20MB) |
Actions (login required)
 |
View Item |