Maulana, Viollita Fardani and Dr. Apt. Valentina Yurina, S. Si., M. Si and apt. Oktavia Rahayu Adianingsih, S. Farm., M. Biomed (2023) Analisis Ekspresi Protein Rekombinan RBD SARS-CoV-2 pada Vektor Lactococcus lactis Menggunakan SDS-PAGE. Sarjana thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Corona Virus Disease 2019 (COVID-19) merupakan penyakit yang disebabkan oleh SARS-CoV-2 yang dapat menimbulkan gejala ringan hingga berat seperti batuk, indra perasa menghilang hingga sesak nafas. Vaksinasi merupakan upaya preventif untuk pencegahan penyebaran COVID-19. Saat ini vaksin yang tersedia hanya melalui injeksi saja, namun rute injeksi lebih invasif untuk golongan usia tertentu. Vaksin mukosal (oral atau intranasal) merupakan alternatif dari rute injeksi, karena less invasive, mudah diberikan dan aman. Pada penelitian ini, gen RBD dari virus SARS-CoV-2 diekspresikan dengan plasmid pNZ8149 dalam bakteri Lactococcus lactis untuk pengembangan kandidat vaksin COVID-19. Receptor Binding Domain (RBD) (termasuk bagian spike protein SARS-CoV-2 yang berinteraksi secara langsung dengan reseptor Angiotensin Converting Enzyme-2 (ACE-2). Gen RBD dari SARS-CoV-2 dioptimasi kodonnya oleh Genscript® hingga sesuai dengan bakteri L. lactis, kemudian dikonstruksi ke dalam plasmid pNZ8149. Plasmid pNZ8149 merupakan plasmid yang bersifat food grade safe karena memiliki gen nisin-controlled sebagai inducible promoter yang digunakan untuk mengekspresikan RBD dalam L. lactis NZ3900. Kemudian dilakukan induksi nisin untuk meningkatkan ekspresi protein dalam NZ3900. Gen RBD berhasil disintesis dan dikloning ke dalam plasmid pNZ8149 dan ditransformasikan dalam L. lactis NZ3900 menggunakan laktosa sebagai marker seleksi. Ekspresi RBD diinduksi menggunakan nisin dengan seri konsentrasi 1, 5, 10, 20 dan 40 ng/mL dan dikuantifikasi menggunakan SDS-PAGE. Hasil penelitian menunjukkan target protein sebesar 28,011 kDa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa RBD berhasil di kloning dan diekspresikan dengan menggunakan plasmid pNZ8149 dalam L.lactis NZ3900 dengan nilai bobot protein yang dihasilkan 28,011 kDa. Kandidat vaksin ini dapat dikembangkan menjadi vaksin mukosal, sehingga mudah diterima bagi akseptor.
English Abstract
Corona Virus Disease 2019 (COVID-19) is a disease caused by SARS-CoV-2 that can cause mild to severe symptoms such as coughing, loss of taste, and shortness of breath. Vaccination is a preventive effort to prevent the spread of COVID-19. Currently, vaccines are available by injection only, but the injection route is more invasive for certain age groups. Mucosal vaccines (oral or intranasal) are an alternative to the injection route, because they are less invasive, easy to administer, and safe. In this study, the RBD gene of the SARS-CoV-2 virus was expressed with the plasmid pNZ8149 in the bacterium Lactococcus lactis for the development of COVID-19 vaccine candidates. Receptor Binding Domain (RBD) includes the spike protein portion of SARS-CoV-2 that interacts directly with the Angiotensin Converting Enzyme-2 (ACE-2) receptor. The RBD gene from SARS-CoV-2 was codon-optimized by Genscript® to match the bacterium L. lactis, then constructed into the plasmid pNZ8149. The plasmid pNZ8149 is a food-grade, safe plasmid because it has a nisin-controlled gene as an inducible promoter used to express RBD in L. lactis NZ3900. Then nisin induction was carried out to increase protein expression in NZ3900. The RBD gene was successfully synthesized and cloned into the plasmid pNZ8149 and transformed into L. lactis NZ3900 using lactose as a selection marker. RBD expression was induced using nisin with concentration series of 1, 5, 10, 20 and 40 ng/mL and quantified using SDS-PAGE. The results showed that RBD was successfully cloned and expressed using plasmid pNZ8149 in L. lactis NZ3900 with a protein weight value of 28.011 kDa. This vaccine candidate can be developed into a mucosal vaccine, making it easily acceptable to acceptors.
| Item Type: | Thesis (Sarjana) |
|---|---|
| Identification Number: | 0523060183 |
| Uncontrolled Keywords: | COVID-19, L.lactis, nisin, RBD, SDS-PAGE |
| Subjects: | 600 Technology (Applied sciences) > 615 Pharmacology and therapeutics > 615.1 Drugs (materia medica) |
| Divisions: | Fakultas Kedokteran > Farmasi |
| Depositing User: | Endang Susworini |
| Date Deposited: | 19 Dec 2023 01:07 |
| Last Modified: | 19 Dec 2023 01:07 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/205413 |
![[thumbnail of DALAM MASA MEMBARGO]](http://repository.ub.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text (DALAM MASA MEMBARGO)
Viollita Fardani Maulana.pdf Restricted to Registered users only until 31 December 2025. Download (6MB) |
Actions (login required)
 |
View Item |