Meilani, Rossy and Prof. Dr. dr. Kusworini,, M.Kes, Sp.PK, and Dr.dr. Hani Susianti,, Sp.PK(K) (2018) Pengembangan Prototipe Antigen dsDNA Untuk Kit Diagnosis Dini Lupus Eritematosus Sistemik. Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Lupus Eritematosus Sistemik (LES) merupakan penyakit keradangan jaringan ikat multisistem yang ditandai dengan terbentuknya autoantibodi terhadap komponen sel sehingga menimbulkan kerusakan pada jaringan. Manifestasi klinisnya sangat bervariasi, sehingga sulit untuk mendiagnosis lupus, karenanya diperlukan tes yang praktis dan akurat untuk meningkatkan kecepatan diagnosis. Salah satu aplikasi alat diagnostik yang mudah digunakan adalah metode rapid test kit, atau immunochromatographic test(ICT). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui performance kandidat antigen DNA untuk deteksi antibodi anti-dsDNA. Sampel penelitian berupa dua kelompok antigen yang berasal dari kultur cell line HeLa dan nukleus limfosit whole blood, antibodi dari serum kontrol dan pasien LES sesuai kriteria SLICC 2012. Metode yang digunakan untuk mengisolasi antigen DNA adalah dengan kit ekstraksi DNA, kemudian dilakukan Dot enzyme immunoassay (DEI) dengan uji titrasi papan catur (checkerboard), untuk menetukan konsentrasi terbaik dari antigen dan antibodi primer yang ditandai dengan densitas perubahan warna yang signifikan. Kemudian dilanjutkan DEI terhadap 24 sampel anti-dsDNA positif dan anti-dsDNA negatif, berdasarkan hasil titrasi checkerboard untuk menentukan spesifisitas dan sensitifitas intensitas warna dot blot assay terhadap anti-dsDNA hasil pengukuran dengan ELISA. Didapatkan perubahan warna yang paling menonjol pada uji checkerboard adalah pada pengenceran antigen dari limfosit whole blood 1/640(konsentrasi antigen 3,16ng/μL) dan pengenceran antibodi 1/3200. Tidak didapatkan perubahan warna yang signifikan pada uji checkerboard dengan antigen dari sel HeLa. Hasil perhitungan uji diagnostik dengan DEI pada cut off 105,23 memiliki sensitivitas 70,83%, spesifisitas 75%, nilai ramal positif(NRP) 73,91% dan nilai ramal negative(NRN) 72,00%. Diperlukan penelitian lebih lanjut tentang pengembangan antigen sel limfosit untuk pembuatan kit diagnostik anti-dsDNA.
English Abstract
Systemic Lupus Erythematosus(SLE) is multisystem connective tissue inflammatory disorder characterized by presence of autoantibodies against cell components that causing tissue’s injury. Clinical manifestations vary widely, so it difficult to diagnosed, therefore a practical and accurate test is needed to improve rate of diagnosis. One of the easiest diagnostic tool applications is using rapid test kit method, or immunochromatographic test(ICT). Aim of this study was to determine performance of DNA antigen candidates for detection of anti-dsDNA antibodies. The samples divided into two groups of antigens derived from HeLa cell line and whole blood lymphocyte nuclei, antibodies from serum control and SLE patients according to SLICC 2012 criteria. DNA extraction kit was used to isolate DNA antigens, followed by Dot enzyme immunoassay (DEI) with checkerboard titration test, to determine the appropriate concentration of antigens and primary antibodies,characterized by significant color change density. Then DEI continued on 24 positive anti-dsDNA and negative anti-dsDNA samples, based on results of the checkerboard titration to determine specificity and sensitivity of dot blot assay color’s intensity against anti-dsDNA measurements with ELISA. The most noticeable color change in checkerboard test was on dilution of 1/640(antigen 3,16ng/μL) from antigen whole-blood lymphocytes and dilution of 1/3200 antibodies. No significant color change was found on checkerboard test with antigen from HeLa cells. Results of diagnostic test with DEI with cut off 105.23 had sensitivity 70.83%, specificity 75%, positive predictive value(PPV) 73,91% and negative predictive value(NPV) 72%. Further research is needed in lymphocyte cell antigen development for development of anti-dsDNA diagnostic kits.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/616.772/MEI/p/2018/041809885 |
| Uncontrolled Keywords: | Lupus Eritematosus Sistemik, anti-dsDNA, limfosit, HeLa, kit diagnostik,Systemic Lupus Erythematous, anti-dsDNA, lymphocyte, HeLa cells, diagnostic kit |
| Subjects: | 600 Technology (Applied sciences) > 616 Diseases > 616.7 Diseases of musculoskeletal system > 616.77 Diseases of connectives tissues > 616.772 Systemic lupus erythematosus |
| Divisions: | Profesi Kedokteran > Spesialis Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran |
| Depositing User: | soegeng Moelyono |
| Date Deposited: | 24 Aug 2022 03:25 |
| Last Modified: | 24 Aug 2022 03:25 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/193492 |
![[thumbnail of Rossy Meilani.pdf]](http://repository.ub.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text
Rossy Meilani.pdf Download (4MB) |
Actions (login required)
 |
View Item |