Pengaruh Vaksin Kinoid IL17-A terhadap Ekspresi NF-κβ pada Glomerulus dan Derajat Nefritis Lupus Mencit Model Lupus Eritematosus Sistemik

Nur’aini, Nafisah (2018) Pengaruh Vaksin Kinoid IL17-A terhadap Ekspresi NF-κβ pada Glomerulus dan Derajat Nefritis Lupus Mencit Model Lupus Eritematosus Sistemik. Magister thesis, Universitas Brawijaya.

Abstract

Lupus Eritematosus Sistemik (LES) merupakan penyakit autoimun sistemik yang dikarakteristikan dengan respon sel B dan sel T yang berlebihan serta hilangnya toleransi imun terhadap antigen dirinya sendiri. Di Indonesia jumlah penderita LES dilaporkan cenderung meningkat, serta masih memiliki angka harapan hidup yang rendah yakni 70% untuk 5 tahun dan 55% untuk 10 tahun. Etiologi dan patogenesis LES sampai saat ini masih belum jelas namun beberapa sitokin proinflammasi diketahui sangat berperan dalam keradangan yang terjadi. IL-17 merupakan salah satu sitokin proinflamasi yang sering dikaitkan dengan patogenesis LES. IL-17A ditemukan meningkat kadarnya baik pada serum pasien LES maupun hewan coba model lupus serta memicu keradangan di ginjal. Ikatan IL-17A dengan reseptornya mengaktivasi faktor transkripsi NF-κβ untuk meningkatkan ekspresi sitokin dan kemokin proinflammasi serta memicu kelangsungan hidup dan diferensiasi sel B pada pasien LES. Pasien LES khususnya nefritis lupus harus menjalani pengobatan jangka panjang. Penelitian saat ini yang sedang dikembangkan mengenai pengobatan penyakit autoimun adalah dengan vaksinasi. Vaksin kinoid adalah terapi imunisasi aktif yang merangsang tubuh untuk menghasilkan antibodi anti-sitokin yang mampu menetralisir sitokin tertentu yang bersifat patogen dan kadarnya meningkat dalam tubuh. Sehingga, nantinya penggunaan vaksin kinoid ini bersifat personalized medicine. Pada penelitian sebelumnya, injeksi vaksin kinoid IFN-α terbukti menurunkan derajat keparahan, proteinuria, dan derajat nefritis lupus. Penggunaan vaksin tersebut juga terbukti aman saat diberikan pada hewan coba. Pada penelitian ini, bertujuan untuk mengetahui pengaruh vaksin kinoid IL-17A dalam memperbaiki regulasi sistem imun tubuh LES terutama pada ekspresi NF-κβ dan derajat nefritis lupus pada mencit model lupus. Mencit Balb/c betina diinjeksi pristan intraperitoneal dosis tunggal 0,5 ml dan diinkubasi selama 8 minggu untuk membuat manifestasi LES seperti pada manusia. IL- 17A dikonjugasi dengan KLH dengan metode pemberian aldehyde menurut Zagury et al. (2009). Konsentrasi dari kompleks IL-17A-KLH diukur menggunakan nanodrop spectrophotometer yang menghasilkan nilai konsentrasi dalam satuan μg/mL. Selanjutnya, vaksin diinjeksikan intramuskular pada mencit dalam tiga dosis berbeda: P1 (125 μg/ml), P2 (250 μg/ml), dan P3 (500 μg/ml) sebanyak tiga kali dengan interval tiga minggu dimulai dari minggu ke 8 setelah induksi pristan. Pada hari ke-60 paska injeksi vaksin yang pertama, seluruh mencit dibedah dan diambil sampel organ ginjal. Ekspresi NF-κβ p65 diukur dengan imunohistokimia, penilaian derajat nefritis lupus dievaluasi melalui gambaran histopatologis dengan HE stainning Rerata ekspresi NF-κβ secara signifikan lebih rendah pada kelompok vaksin dibandingkan dengan kontrol positif (p = 0,021). Akan tetapi tidak ada perbedaan yang signifikan antara masing-masing dosis (p=0.773, p=0.248, p=0.248). Injeksi vaksin kinoid IL-17A menunjukkan perbaikan histologis yang signifikan pada jaringan ginjal dibandingkan dengan kontrol positif (p = 0,004). 75% kontrol positif menunjukkan nefritis lupus derajat 3, sementara 100% kelompok vaksin P3 (500 μg/ml) menunjukkan nefritis lupus derajat 1. Vaksin Kinoid IL-17A yang dikonjugasi dengan KLH mampu menurunkan ekspresi NF-κβ pada glomerulus dan derajat nefritis lupus mencit model LES.

English Abstract

Systemic Lupus Erythematosus (SLE) was a systemic autoimmune disease characterized by excessive response of B cells and T cells and loss of immune tolerance to self-antigen. In Indonesia the number of SLE patients was reported to be increasing, and still had low life expectancy. The etiology and pathogenesis of SLE still unclear but some proinflammatory cytokines were known to play a mayor role in the inflammation of SLE patients. IL-17A was found to be elevated in both serum SLE patients and animal models of lupus, and also triggered inflammation untill injury to the kidneys. IL-17A bond to its receptor and activated transcription factor NF-κβ to increased the expression of proinflammatory cytokines and chemokines as well as triggered survival and differentiation of B cells in SLE patients. SLE patients especially lupus nephritis should undergo long-term treatment and monitoring. The latest research on treatment of autoimmune disease was vaccination. The kinoid vaccine was an immune therapy which actively stimulated body to produce anti- cytokine antibodies that were able to neutralize certain pathogen cytokines and over- expressed in the body. Thus, someday the use of this kinoid vaccine is personalized medicine. Previous study, Injection of kinoid IFN-α vaccine showed decrease in severity, proteinuria, and decreased degree of nephritis lupus. It was also proven safe when administered to experimental animals. So, in this study, we aimed to know the effect of kinoid IL-17A vaccine in improving immune system regulation in SLE especially on NF-κβ expression and degree of lupus nephritis in mice model systemic lupus erythematosus. Female Balb/c mice were given single intraperitoneal injection of 0.5 ml pristane and incubated 8 weeks to manifested as SLE patients. IL-17A was coupled to keyhole limpet hemocyanin (KLH) and administered with aldehyde according to Zagury et al (2009). The concentrations of the IL-17A-KLH complex were measured using a nanodrop spectrophotometer that showed concentration values in units of μg/mL. Furthermore, kinoid IL-17A vaccine was injected intramuscularly in three different doses: P1 (125 μg/ml), P2 (250 μg/ml), and P3 (500 μg/ml) and given three times with three weeks interval start from 8th weeks after pristane induction. On 60th day after first injection of kinoid IL-17A vaccine, all of mice were dissected and samples of kidney organs were collected. The expression of NF-κβ was measured by immunohistochemistry, degree of nephritic lupus was evaluated by histopathological finding with HE stainning. Mean of NF-κβ expressions were significantly lower in vaccine’s group compared to possitive controls (p=0.021). But there were not significantly different between each doses (p=0.773, p=0.248, p=0.248). Injection of kinoid IL-17A vaccine showed significant histological differences in renal tissue compared with positive controls (p = 0.004). 75% possitive controls showed nephritic lupus grade 3, while 100% vaccine’s groups P3 (500 μg/ml) showed nephritic lupus grade 1 . Kinoid IL-17A vaccine coupled to KLH was able to reduce NF-κβ expression on glomerulus and degree of nephritic lupus in mice model systemitic lupus erythematosus.

Other obstract

-

Item Type:	Thesis (Magister)
Identification Number:	TES/616.772/NUR/p/2018/041802335
Uncontrolled Keywords:	-
Subjects:	600 Technology (Applied sciences) > 616 Diseases > 616.7 Diseases of musculoskeletal system > 616.77 Diseases of connectives tissues > 616.772 Systemic lupus erythematosus
Divisions:	S2/S3 > Magister Ilmu Biomedis, Fakultas Kedokteran
Depositing User:	Endang Susworini
Date Deposited:	19 Jul 2022 02:03
Last Modified:	19 Jul 2022 02:03
URI:	http://repository.ub.ac.id/id/eprint/192238

Text NAFISAH NUR ‘AINI.pdf Download (8MB)

Actions (login required)

View Item