Gamal, - (2017) Uji Deteksi Antibodi Siga Saliva Pasien Tuberkulosis Terhadap Antigen Ag38-Rekombinan Mycobacterium Tuberculosis Strain Indonesia. Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Sampai saat ini penyakit tuberkulosis (TB) paru masih menjadi masalah kesehatan yang utama di Indonesia. Terapi yang efektif tergantung pada diagnosis yang cepat dan tepat dari Mycobacterium tuberculosis. Kultur tetap menjadi gold standard untuk diagnosis M. tuberculosis dan pemeriksaan BTA merupakan salah satu alat diagnosis baku yang digunakan. Respon inflamasi dari sel fagosit saat aktivasi M. tuberculosis. Pada awalnya M. tuberculosis akan direspon oleh makrofag dan sel dendritik. Kemudian akan merespon imunitas adaptif, diantaranya MHC, CD1, CD80, IL-12, IL-18, TNF-α, IL-1β. Pada tahap selanjutnya protein antigen M. tuberculosis akan dipaparkan dengan sel T spesifik antigen. Lalu terjadi ikatan antara sIgA pada saliva dengan protein antigen. Oleh karenanya, deteksi s-IgA dalam saliva dapat menunjukkan adanya infeksi M. tuberculosis yang dapat digunakan sebagai alat diagnostik infeksi tuberkulosis. Penelitian ini bertujuan untuk menguji sensitivitas dan spesifisitas protein antigen Ag38-rek dalam mendeteksi antibodi sIgA pada pasien tuberkulosis yang diharapkan dapat membuktikan hipotesis bahwa antigen Ag38-rek M. tuberculosis digunakan untuk mendeteksi antibodi s-IgA saliva pasien tuberculosis. Pada tahap awal penelitian protein antigen Ag38-rek diisolasi untuk mendapatkan antigen murni yang akan digunakan pada penelitian lebih lanjut. Pemeriksaan dot blot dilakukan untuk mengetahui konsentrasi minimum protein antigen Ag38-rek yang dapat memicu ikatan dengan sIgAdalam saliva untuk kemudian digunakan sebagai uji sensitivitas dan spesifisitas protein. Hasil akhir overekspresi Ag38 dilakukan setelah kultur diinduksi dengan 500 uM dan tidak ada beda nyata dengan induksi dengan 1 M IPTG. Pemanenan dilakukan 3 jam setelah induksi dan tidak menunjukkan beda nyata dengan induksi 12 jam. 1 L kultur akan menghasilkan massa sebanyak 2.4 gr pellet basah dan menghasilkan protein Ag38 sebanyak 7 mg/ 1 gr pellet basah. Purifikasi Ag38-rec dapat dicapai menggunakan kolom Ni-TED, menghasilkan 2mg/g wet pellet, dengan kemurnian 80-90%. Tahap selanjutnya adalah pengujian sensitivitas dan spesifisitas protein antigen Ag38-rek M. tuberculosis spesifik IgA dengan metode dot blot. Dot Blot Antigen Ag38-rek dengan berbagai konsentrasi dengan saliva pasien TB dengan berbagai konsetrasi pengenceran menunjukkan hasil positif pada semua blotting dengan tingkat kebiruan warna yang berbeda. Hasil ini dikarenakan protein Ag38-rek belum terpurifikasi dengan murni, sehingga hasil dot blot tidak spesifik. iii Antigen ini dapat membedakan antara saliva pasien TB BTA (+) dengan subjek sehat. PPD menunjukkan sensitivtitas lebih tinggi (90% dengan 95% dari Coefisien Interval [95% CI]) tetapi secara statistik tidak signifikan (p> 0,05) dibandingkan Ag38-rek (80% dengan [95% CI]). nilai Positive Predictive Value dan Negative Predictive Value (PPV dan NPV) dari kedua antigen tidak secara signifikan berbeda secara statistik (p> 0,05). reaktivitas antigen Ag38-rek cukup tinggi, sehingga menghasilkan warna ungu gelap ketika diuji dengan saliva dari pasien TB dengan BTA (+) baik sebagai suspensi saliva utuh maupun sebagai supernatant. Sensitivitas Ag38-rek cukup tinggi, meskipun ini masih lebih rendah dari PPD (80% berbanding 90%) namun kedua antigen secara signifikan berbeda pada analisis statistik (p> 0,05). Antigen 38-rek memiliki spesifisitas yang rendah (36%), yang jauh lebih rendah dari PPD (70%) (p <0,05). Kesimpulan dari penelitian ini menunjukkan bahwa protein antigen Ag38-rek berpotensi untuk mendeteksi antibodi sIgA saliva pasien tuberculosis. Penelitian ini juga menunjukkan bahwa protein antigen Ag38-rek memiliki sensitivitas yang cukup tinggi dan spesifisitas yang rendah dalam mendeteksi antibodi sIgA saliva pasien tuberkulosis.
English Abstract
An evaluation of the humoral response based on secretory immunoglobulin A levels in the saliva of pulmonary tuberculosis (TB) acid-fast bacillus-positive (TB-AFB+) patients against a recombinant 38 kDa antigen (Ag38-rec) is reported. A total of 60 saliva samples consist of 30 TB-AFB+ patients and 30 healthy controls were tested against 500 ng of semi-purified antigen using the dot blot method. Results showed that the protein antigen could differentiate between healthy individuals and TB-AFB(+) patients. Whole saliva demonstrated better reactivity than centrifuged saliva. The Ag38-rec protein indicated statistically comparable sensitivity (80% versus 90%), but lower specificity (36.6% versus 70%) compared with purified protein derivative (PPD). Surprisingly, both antigens similarly recognized secretory immunoglobulin A in the saliva of the healthy group (50% versus 50%, respectively). These findings suggest that the Ag38-rec protein originating from a local strain of Mycobacterium tuberculosis may be used for TB screening, however require purity improvement.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/616.929 4/GAM/u/2017/041703987 |
| Uncontrolled Keywords: | ANTIGEN - ANTIBODY REACTIONS, MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS, SALIVA |
| Subjects: | 600 Technology (Applied sciences) > 616 Diseases > 616.9 Other disease > 616.929 7 Staphylococcal infections > 616.929 4 Mycobacterium infections |
| Divisions: | S2/S3 > Magister Ilmu Biomedis, Fakultas Kedokteran |
| Depositing User: | Nur Cholis |
| Date Deposited: | 30 Aug 2017 02:29 |
| Last Modified: | 16 Oct 2020 04:16 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/1876 |
![[thumbnail of BAGIAN DEPAN.pdf]](http://repository.ub.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text
BAGIAN DEPAN.pdf Restricted to Repository staff only Download (705kB) |
|
Text
BAB.I.pdf Restricted to Repository staff only Download (31kB) |
|
Text
BAB.II.pdf Restricted to Repository staff only Download (1MB) |
|
Text
BAB.III.pdf Restricted to Repository staff only Download (39kB) |
|
Text
BAB.IV.pdf Restricted to Repository staff only Download (73kB) |
|
Text
BAB.V.pdf Restricted to Repository staff only Download (690kB) |
|
Text
BAB.VI.pdf Restricted to Repository staff only Download (46kB) |
|
Text
BAB.VII.pdf Restricted to Repository staff only Download (17kB) |
Actions (login required)
 |
View Item |