Ismail, Mahrus (2015) Polimorfisme Gen Il-17a Terhadap Kadar Il-17a Dan Perbedaan Kronisitas Penderita Nefritis Lupus (Nl). Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Nefritis Lupus (NL) adalah penyakit autoimun dan merupakan komplikasi serius dari Lupus Eritematosus Sistemik (LES). Manifestasi klinis nefritis lupus terjadinya bervariasi, mulai dari asimtomatik mikroskopik hematuria sampai gagal ginjal. Pada etnis Asia dari hasil penelitian disebutkan bahwa nefritis lupus memiliki prognosis lebih buruk dan diperkirakan dapat berakhir dengan gagal ginjal dalam 5 tahun. Selain manifestasi klinis, nefritis lupus dapat ditandai juga dengan derajat kelainan/ kronisitas yang dinilai dari kelas histopatologisnya. Manifestasi tersebut diketahui dapat terjadi dengan adanya banyak mekanisme yang terlibat dalam patogenesis nefritis lupus, diantaranya adalah ekspresi inflamasi dari sitokin yang berperan penting dalam proses terjadinya penyakit. Adapun sitokin yang diduga berperan besar pada proses inflamasi adalah IL-17A. Tingkat ekspresi IL-17A tersebut ternyata dipengaruhi oleh polimorfisme gen IL-17A. Hal ini kemungkinan besar mempengaruhi pada jumlah produksi IL-17A, sehingga jika produksi IL-17A meningkat maka akan mempengaruhi terjadinya inflamasi dan nilai derajat kelainan/ kronisitas nefritis lupus. Untuk mengetahui proses inflamasi tersebut diperlukan integrasi analisis menggunakan penanda molekuler dan klinis. Sehingga tujuan penelitian ini untuk mengetahui kaitan polimorfisme gen IL-17A (rs 2275913) terhadap kadar IL-17A yang diperoleh dari darah dan derajat kelainan/ tingkat kronisitas nefritis lupus yang diperoleh dengan analisis secara klinis. IL-17A adalah sitokin proinflamasi yang memiliki peran pada patogenesis sebagai penyakit autoimun. IL-7A terletak pada kromosom 6p12, terdiri dari 3 ekson dan 2 intron. Beberapa polimorfisme IL-17A telah dilaporkan, namun hanya beberapa saja yang terkait dengan penyakit autoimun, diantaranya hanya polimorfisme gen IL-17A pada promoter G-197A (rs2275913) yang dihubungkan dengan resiko terjadinya rheumatoid arthritis dan colitis ulserativa. Penelitian ini dilakukan secara Cross sectional dengan rancangan kasus kontrol. Jumlah sampel adalah 40 pasien LES yang berkunjung di poliklinik dan bangsal rawat inap bagian penyakit dalam Rumah Sakit Siful Anwar (RSSA) Malang, pasien kasus adalah yang nefritis lupus dan pasien kontrol adalah lupus tanpa nefritis. Polimorfisme gen IL-17A dilakukan dengan isolasi DNA dengan menggunakan metode dari reagen merk promega (Wizard Genomic DNA Purification Promega Kit). Kemudian hasil isolasi DNA diuji secara kualitatif dengan elektroforesis pada gel agarose dan secara kuantitatif dengan menggunakan spektrofotometer, selanjutnya diamplifikasi menggunakan primer IL-17A forward (5`- TCAAGGTACATGACACCAG AAG-3`) dan primer reverse (5`- GATGAG- TTTGTGCCTGCTATGA-3`). Hasil amplifikasi dipurifikasi dan di Sequencing untuk mengetahui urutan sekuen DNA. Analisis polimorfisme dengan pendekatan bioinformatika yaitu pencarian data basa nucleotida gen SNP IL-17A, kemudian disejajarkan sekuens-sekuens sampel dengan basa SNP dengan alignment menggunakan program Bio-edit. Kadar IL-17A di darah diperiksa dengan metode sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Derajat kelainan/ kronisitas NL ditetapkan dengan biopsi kelas histopatologi menggunakan Ultrasonografi (USG-Guided). Hipotesis dibuktikan dengan uji normalitas data dan uji homogenitas, dilanjutkan dengan Chi-square, Odds ratio dan korelasi Spearman, menggunakan SPSS for Windows software version 17.0. Hasil penelitian dari 40 sampel pasien Lupus Eritematosus Sistemik (LES) terdiri atas 25 pasien Nefritis Lupus (NL) dengan indeks kronisitas ≥ 1 dan 15 pasien LES atau senilai dengan indeks kronisitas =0. Adapun karakteristik dari data demografi mayoritas subjek berjenis kelamin wanita hal ini karena pengaruh dari faktor hormon seks yang mempengaruhi kerentanan terhadap perkembangan LES. Hasil dari 25 sampel kasus indeks kronisitas rendah (1-4) yaitu sebanyak 80 % dan indeks kronisitas tinggi (4) hanya 20 %. Hasil analisis polimorfisme genotip mutan dari 25 sampel pasien nefritis lupus adalah adanya perubahan dari basa A (SNP IL-17A) menjadi basa G (pada sampel) yang terjadi pada urutan basa 201, dengan uji chi square menunjukkan nilai OR 8,48 (p=0,009). Hal ini dapat diartikan bahwa penderita nefritis lupus dengan genotip yang diduga mutan heterozygot (G) beresiko 8,48 kali untuk mengalami kronisitas lebih berat dibandingkan dengan penderita dengan genotip yang diduga Wild homozygot (A). Uji perbandingan kadar IL-17A dengan perbedaan genotip mutan dan tidak mutan pada alel G dan alel A menghasilkan perbedaan yang signifikan dengan hasil (p; 0,0065) karena nilai (p 0,05) maka terdapat perbedaan bermakna seiring dengan adanya peningkatan kadar IL-17A serum pada kelompok mutan. Sehingga terdapat perbedaan bermakna antara kadar IL-17A pada genotip mutan (G) dan genotip wild (A), hal ini dapat disimpulkan bahwa sesuai dengan hasil penelitian sebelumnya yaitu berkorelasi sangat kuat pada gagal ginjal kronis dibandingkan dengan gagal ginjal akut. Adapun hasil antara kadar IL-17A penderita nefritis lupus dengan perbedaan kronisitas yaitu pada Indeks kronisitas rendah nilai rerata 213,25±13,46 pg/ml sedangkan pada Indeks kronisitas tinggi nilai rerata adalah 351,65 ± 39,15 pg/ml dengan angka significancy (p) 0,337 (Nilai p 0,05) sehingga dapat disimpulkan bahwa tidak ada perbedaan bermakna antara kadar IL-17A pada indeks kronisitas tinggi dan indeks kronisitas rendah. Hal ini dimungkinkan sampel yang diukur adalah kadar pada darah bukan pada urin, karena kadar IL-17A yang meningkat dalam urin berhubungan erat dengan kerusakan ginjal kronik, terutama penyakit tubulointerstitial dan glomerulosklerosis.
English Abstract
Nefritis Lupus (NL) is one of autoimun disease which serious coplication of Systemic Lupus Ery motosus (LES). Lupus Nephritis Clinical manifestations accurrence in many cause, from asympotmatic micrroscopic hemturia until renal failure. In Asian ethnicity researchs mentioned that lupus nephiritis have a worse prognosis and is expected to end up with kidney failure in 5 years letters. Ano r clinical manifestations, lupus nephritis can be detected also by levels of abnormality chronicity which assessed from ir heispatology class. That manifestations are known to occur in many mechanisms involved in pathogenesis of lupus nephritis, including expression of inflammatory cytokines which play an important role in disease process. cytokines which possible to play a major role in inflammatory process is IL-17A. Expressions levels of IL-17A are apparently influenced by genetic polymorphisms of IL-17A. That is likely to affect amount of IL-17A production, so if production of IL-17A increases, it will be affect value of levels of inflammation and levels of disorders/chronicity of lupus nephritis. To determine inflammatory process requires integration of analysis using molecular markers and clinical. So it can be known relation of IL-17A gene polymorphism (RS 2275913) that molecularly analyzed with levels of IL-17A that was obtained from blood and levels of abnormality / chronicity rate obtained with lupus nephritis clinical analysis. IL-17A is a proinflammatory cytokine that has a role in pathogenesis of autoimmune diseases. IL-7A is located on chromosome 6p12, consists of 3 exons and 2 introns. Some polymorphisms of IL-17A has been reported, but only a few are related with autoimmune diseases, one of m is only IL- 17A gene polymorphism in promoter G-197A (rs2275913) were associated with risk of rheumatoid arthritis and ulcerative colitis. This study was conducted with a cross sectional case-control design. number of samples was 40 LES patients who visit clinic and inpatient wards of internal diesase in Saiful Anwar Hospital (RSSA) Malang, patients as case are patients with lupus nephritis and control patients are lupus patients without nephritis. IL-17A gene polymorphisms examined by DNA isolation using Promega Wizard Genomic DNA Purification Kit. n results of DNA isolation to be tested qualitatively by agarose gel electrophoresis and to be tested quantitatively using a spectrophotometer, n this sample to be amplified using primers IL-17A forward (5- TCAAGGTACATGACACCAG AAG-3 ) and reverse primer (5- GATGAGTTTGTGCCTGCTATGA- 3 ). results of amplification was purified and to be sequencing to determine sequence of DNA`s sequence. Polymorphism analysis with bioinformatics approaches such as collecting data SNP gene nucleotide bases of IL-17A, n aligned sequences of samples with SNP bases with alignment using Bio-editing program. IL-17A levels in blood are examined by method of sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). degree of abnormality/ chronicity NL was determined by biopsy histopathology grade using Ultrasound (Ultrasound-Guided). hypo sis proved by data normality test and homogeneity test, Chi-square and odds ratio, Spearman correlation, using SPSS for Windows software version 17.0. results of this research were 40 samples of Systemic Lupus Ery matosus (LES) patients consisted of 25 patients with Lupus Nephritis (NL) have chronicity index ≥ 1 and 15 LES patients without NL or valued by chronicity index = 0. characteristics of demographic data showed that subject majority was female, because sex hormones factors affecting susceptibility to development of LES. results from 25 samples of low chronicity index cases (1-4) that was as much as 80% and high chronicity index ( 4) was only 20%. Whereas mutant genotype polymorphism analysis result from 25 sample was a change of bases A (SNP IL-17A) into base G (in sample) that occur on order of 201 bases, chi-square test showed that value of OR is 8.48 (p = 0.009). This result may imply that lupus nephritis patients with suspected mutant heterozygous genotype (G) are at risk for experiencing chronicity 8.48 times heavier than patients with genotype suspected Wild homozygot (A). Test comparison of levels of IL-17A with mutant and no mutant genotype differences in allele G and A showed a significant difference with a significant number (p) was 0.0065. And because of value p 0.05, y will have a significant difference due to presence of elevated levels of IL-17A serum in mutant group. So that re was a significant difference between levels of IL-17A in mutant genotypes (G) and wild genotypes (A), it can be concluded that this result according with results of previous studies which correlate very strongly in chronic renal failure compared to acute renal failure. results of levels IL-17A lupus nephritis patients with difference between chronicity showed that low chronicity index has mean value 213.25 ± 13.46 pg / ml while high chronicity index has mean value 351.65 ± 39.15 pg / ml with numbers significancy (p) 0.337 (p-value 0.05). It can be concluded that re was no significant difference between levels of IL-17A in high chronicity index and low chronicity index. It was possible because sample in this research was measured at level of blood ra r than urine, and previous research explain that levels of IL-17A increasing in urine was closely related to chronic kidney damage, especially tubulointerstitial and glomerulosclerosis disease.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/616.772/MAH/p/2015/041501262 |
| Subjects: | 600 Technology (Applied sciences) > 616 Diseases > 616.7 Diseases of musculoskeletal system |
| Divisions: | S2/S3 > Magister Biologi, Fakultas MIPA |
| Depositing User: | Sugiantoro |
| Date Deposited: | 30 Apr 2015 15:34 |
| Last Modified: | 30 Apr 2015 15:34 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/158407 |
Actions (login required)
 |
View Item |