Puteri, DindaIbanezVicaMegaTamara (2014) Cloning of TLR 9 Isoform B and Immunomodulatory Effects of CpG Oligodeoxynucleotides in Cobia (Rachycentron canadum). Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Reseptor seperti tol (TLR) dianggap memicu sistem kekebalan tubuh bawaan setelah pengakuan terhadap pola molekul terkait patogen (PAMP). Di antara TLR, reseptor seperti tol (TLR9) terkenal karena perannya dalam respon imun bawaan dengan mengenali DNA bakteri yang mengandung motif CPG yang tidak tergeletak. Peran TLR9 di Cobia tidak diketahui setelah merangsang dengan ODN CPG. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkloning tlr9 isoform b cobia. untuk menentukan kemanjuran induksi dan perlindungan setelah merangsang dengan odn cpg dan setelah diimunisasi dengan kombinasi ODN CPG yang dicampur dengan bakteri yang terbunuh formalin dan alhydrogelin cobia. Ada dua isoform TLR 9 di Cobia. Dalam penelitian sebelumnya, kami telah dikloning TLR 9 isoform A. Baru-baru ini, dalam laporan kami tlr 9 isoform bwas dikloning dari Cobia. CDNA panjang penuh dari RCTLR9 isoform B adalah 3113 bp, pengkodean polipeptida dari 1009 asam amino. RCTLR9 isoform B memiliki dua belas pengulangan kaya leusin, LRR khas dan LRR CT (domain c-terminal). Hasil penelitian menunjukkan CPG ODN 1668, CPG ODN 2395 menginduksi ekspresi tinggi TLR9 A & B signifikan, MYD88, MX, kemokin CC dan IL-1β. Selain itu, CPG 1668 dan 2395 kelompok yang dirawat menunjukkan nilai peroksida tertinggi, konten lisozim dalam serum. Sementara itu Cobia ditantang dengan Photobacterium Damsela e Subsp. PISCICIDA, CPG ODN 1668 dan 2395 kelompok yang dirawat menunjukkan persentase kelangsungan hidup yang tinggi. Perlu, ekspresi TLR9 dan induksi pada usus Cobia juga perlindungan kemanjuran pasca stimulasi ODN CPG secara intraperitone telah diamati. Dibandingkan dengan CPG ODN 1668, CPG ODN 2395 menginduksi ekspresi tinggi RCTLR9 A & B yang signifikan, MYD88. Kelompok yang dibandingkan dengan hanya diadministrasikan dengan adjuvant, kelompok merangsang intraperitone dengan CPG 1668 ODN dicampur dengan formalin membunuh bakteri dan alhydrogel ® mengungkapkan ekspresi signifikan dalam hal RCTLR9 A & B isoforms pada 10 DPV (50 & 30 lipatan) dan 2395 odn Campuran telah diinduksi MYD88 pada 6 DPV (21 lipatan). Kemudian, IL-1β meningkat pada 6 DPV pada kelompok 1668. Formulasi vaksin aman dalam usus tanpa adhesi atau pigmentasi, tidak ada respons histopatologis dan inflamasi yang diamati. Sepenuhnya, hasil ini menyarankan bahwa CPG ODNS sebagai ajuvan dalam vaksin memiliki potensi mekanisme kekebalan pada usus untuk mencegah infeksi bakteri pada kobia.
English Abstract
Toll-like receptors (TLR) are considered to trigger the innate immune system upon recognition of pathogen associated molecular patterns (PAMPs). Among TLR, Toll-like receptor 9 (TLR9) is well-known for its role in the innate immune response by recognizing bacterial DNA containing unmethylated CpG motif. The role of TLR9 in cobia is unknown after stimulating with CpG ODNs. Objectives of this study are to clone TLR9 isoform b of cobia;to determine the induction and protection efficacy after stimulating with CpG ODNs and after immunized with combination of CpG ODNs mixed with formalin-killed bacteria and alhydrogelin cobia. There are two isoform of TLR 9 in cobia. In the previous study, we have been cloned TLR 9 isoform A. Recently, in our report TLR 9 isoform Bwas cloned from the cobia. The full-length cDNA of RcTLR9 isoform B was 3113 bp, encoding polypeptide of 1009 amino acids. RcTLR9 isoform B has twelve conserved leucine-rich repeats, a LRR typical and a LRR CT (C-terminal domain). Results showed CpG ODN 1668, CpG ODN 2395 induced significant high expression of TLR9 A& B, MyD88, Mx, chemokine CC and IL-1β. In addition, CpG 1668 and 2395 treated group showed highest peroxide values, lysozyme content in serum. Meanwhile cobia challenged with Photobacterium damsela e subsp. piscicida , CpG ODN 1668 and 2395 treated group showed high survival percentage.Recently, the TLR9 expression and its induction in cobia intestine also protection efficacy post CpG ODN stimulation intraperitoneally has been observed. Compared with CpG ODN 1668, CpG ODN 2395 induced significant high expression of RCTLR9 A& B, MyD88. Compared groups with only administrated with adjuvant, group stimulated intraperitoneally with CpG 1668 ODN mixed with formalin killed bacteria and alhydrogel ® revealed significant expression in terms of RCTLR9 A & B isoforms at 10 dpv (50 & 30 folds) and 2395 ODN mixture have induced high MyD88 at 6 dpv (21 folds). Then, IL-1β increased at 6 dpv in 1668 group. The vaccine formulation was safe in intestine without adhesions or pigmentations, no histopathological and inflammatory response were observed. Completely, these results suggested that CpG ODNs as an adjuvant in vaccine has potential immune mechanism in the intestine to prevent bacterial infection in cobia.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/597.7/PUT/c/040141576 |
| Subjects: | 500 Natural sciences and mathematics > 597 Cold-blooded vertebrates > 597.7 Perciformes |
| Divisions: | S2/S3 > Magister Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan |
| Depositing User: | Endro Setyobudi |
| Date Deposited: | 13 Aug 2014 10:23 |
| Last Modified: | 13 Aug 2014 10:23 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/157879 |
Actions (login required)
 |
View Item |