Anyndita, NadyaVM (2017) Upaya Transformasi Dan Over-Produksi Epitop EBV Dalam E.Coli BL21. Sarjana thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
EBV merupakan salah satu jenis virus herpes yang menyerang sel B pada manusia sehingga menyebabkan terjadinya nasopharyngeal carcinoma (NPC). Pencegahan jenis kanker ini menjadi masalah karena belum ditemukan vaksin yang sesuai dan efektif. Studi ini bertujuan untuk mentransformasi dan memproduksi epitop EBV gp350/220 agar dapat digunakan pada penelitian selanjutnya baik secara in vitro maupun in vivo. Sekuens epitop EBV diinsersi ke dalam plasmid rekombinan pMAL-p5x dengan tandem repeat 3 kali yang masing-masing dipisahkan oleh asam amino methionin. Plasmid ini ditransformasi ke E.coli BL21 dan dilakukan over-produksi menggunakan IPTG 2 mM. Keberhasilan transformasi ditentukan berdasarkan hasil restriksi mengunakan enzim AflIII pada gel agarosa 0,8 %. Protein periplasmid diisolasi menggunakan larutan hiper-osmotik dan dianalisis menggunakan gel poliakrilamid SDS-PAGE. Berdasarkan hasil pemotongan enzim restriksi, plasmid berhasil dipotong menjadi 2 ukuran yaitu 4450 dan 1500 bp. Hal ini mengindikasikan transformasi berhasil dilakukan dan plasmid rekombinan telah terkandung dalam vektor E.coli. Hasil isolasi protein menunjukkan adanya pita protein berukuran sekitar 50 kDa pada sampel transforman, sedangkan pada sampel wild-type tidak ditemukan adanya pita protein dengan ukuran tersebut. E.coli transforman yang diinduksi IPTG memiliki jumlah protein yang lebih tinggi dibandingkan dengan yang tanpa induksi IPTG, yaitu sebesar 7,811 dan 3,303 μg. Hal ini juga didukung dengan ketebalan pita yang lebih tinggi pada E.coli transforman dengan induksi IPTG. Hal ini mengindikasikan bahwa E.coli transforman memiliki kemampuan untuk mengekspresikan protein target dan IPTG berhasil meningkatkan produksi protein.
English Abstract
EBV considered as one of herpes virus type which infect B cell on human and causes nasopharyngeal carcinoma (NPC). The prevention of this disease remains unseccessful since its vaccine had not been discovered. This study aimed to transformed and overexpressed epitope EBV gp350/220 using E.coli BL21 which will be useful for the next research as well as in vivo and in vitro. EBV epitope sequences were were inserted into pMAL-p5x plasmid with 3 tandem repeats and metionine to separate each sequences. This plasmid then transfomed into E.coli BL21 and overproduced using 2 mM IPTG. Plasmid transformation were validated using AflIII restriction enzyme in 0,8% agarose. Periplasmic protein were isolated using hyper-osmotic solution and analyzed using SDS-PAGE. Based on the result of restriction showed plasmid finally cutted into 1500 and 4540 bp. Protein isolation showed protein band around 50 kDa at transformant, but not in wildtype. Beside, IPTG induced E.coli has a total protein amount higher than the uninduced, which are 7,811 and 3,303 μg. This result also supported by thicker band in SDS-PAGE indicating the transformant has an ability to produce protein target dan IPTG successfully increase its expression.
| Item Type: | Thesis (Sarjana) |
|---|---|
| Identification Number: | SKR/MIPA/2017/224/051704401 |
| Subjects: | 500 Natural sciences and mathematics > 570 Biology |
| Divisions: | Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam > Biologi |
| Depositing User: | Kustati |
| Date Deposited: | 14 Jun 2017 12:27 |
| Last Modified: | 14 Jun 2017 12:27 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/155266 |
Actions (login required)
 |
View Item |