Ekstraksi dan Karakterisasi Enzim Protease dari Daun Kelor (Moringa oliefera Lamk.) dengan Penambahan Stabilisator

Nahdhiyati F, Azmy (2014) Ekstraksi dan Karakterisasi Enzim Protease dari Daun Kelor (Moringa oliefera Lamk.) dengan Penambahan Stabilisator. Sarjana thesis, Universitas Brawijaya.

Abstract

Perkembangan ilmu bioteknologi telah menempatkan penggunaan enzim sebagai salah satu alternatif untuk berbagai keperluan, misalnya bidang industri dan pengobatan. Salah satu enzim yang telah banyak dipelajari adalah enzim protease yang berfungsi mengkatalis hidrolisis ikatan peptida pada protein. Enzim protease merupakan enzim penting dan memiliki nilai ekonomi yang tinggi karena aplikasinya sangat luas. Perdagangan protease mencapai 60% dari total penjualan enzim dunia. Keberadaan enzim protease di Indonesia sangat sedikit untuk memenuhi kebutuhan industri. Dilihat dari harga enzim protease di pasaran cukup tinggi, oleh karena itu perlu adanya pengembangan di produksi enzim protease. Untuk memenuhi kebutuhan enzim protease di Indonesia dapat digunakan daun kelor sebagai salah satu alternatif penghasil protease. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan enzim protease yang bersumber dari daun kelor. Untuk memperoleh enzim protease pada daun kelor salah satu caranya yaitu dengan cara ekstraksi. Di dalam proses untuk mendapatkan ekstrak enzim protease ini akan mempengaruhi aktivitas enzim protease. Untuk menghindari menurunnya aktivitas enzim protease dari daun kelor ini maka diperlukan stabilisator. Stabilisator yang digunakan biasanya yaitu asam askorbat dan EDTA. Oleh karena itu pada penelitian ini digunakan stabilisator EDTA, asam askorbat dan gabungan keduanya untuk mempertahankan aktivitas enzim protease yang bersumber dari daun kelor Hasil dari penelitian ini yaitu telah diperoleh enzim protease dari daun kelor dengan aktivitas tertinggi terdapat pada perlakuan A3E3 dengan penambahan asam askorbat 0,3% dan EDTA 15 mM sebesar 2,45 U/mg. Enzim dengan aktivitas tertinggi yang dihasilkan diendapkan dengan garam amonium sulfat fraksi terbaik 60%. Enzim hasil pengendapan kemudian didialisis. Tingkat kemurnian enzim hasil dialisis sebesar 3,21 kali. Karakterisasi enzim protease A3E3 memiliki aktivitas optimal pada pH 6 dan suhu 600C dengan spesifitas substrat kasein. Kestabilan enzim pada suhu 40-600C dengan pH 4 – 7. Enzim ini memiliki nilai KM sebesar 0,042 mg. ml-1 dan VMaks sebesar 2,33mg. ml-1 .menit-1. Aktivitas enzim ditingkatkan dengan penambahan ion logam ZnCl2, FeCl2, dan MgCl2. Enzim protease ini dihambat oleh inhibitor HgCl2 dan enzim ini bisa dikategorikan sebagai protease sistein. Enzim protease dari daun kelor ini memiliki berat molekul sebesar 156,23 kDa setelah dikonfirmasi melalui zimogram

English Abstract

The development of biotechnology has put the utilization of enzymes as an alternative for variety purposes, such as industrial and medical fields. One that has been widely studied enzyme is a protease enzyme that catalyzes the hydrolysis of peptide bonds in proteins. The protease enzyme is an important enzyme with high economic value because its large application. They act as an important industrial enzyme occupying for about 60% of total enzyme market. The availability of the protease enzyme in Indonesia is very limited to meet the needs of industry. Based on the high price and demand, therefore the development in the production of protease enzyme is needed. Moringa leaves can be used as one alternative protease source to meet the needs of the protease enzyme in Indonesia. This study aims to determine the activity of the protease enzyme from the leaves of Moringa. Protease enzyme from Moringa leaves can be obtained by extraction. But extraction can affect the activity of the protease enzyme. To maintain activity of the protease enzyme of Moringa leaves, it is necessary to use stabilizers. Stabilizer used is usually the ascorbic acid and EDTA. Therefore this study used EDTA, ascorbic acid, and a combination of both as stabilizer. The protease enzyme from Moringa leaves showed highest activity (2.45 U / mg) with the addition of 0.3% ascorbic acid and 15 mM EDTA. This result was selected for further precipitation with ammonium sulphate at 60% and then dialyzed against phosphate buffer. The level of purity of the enzyme increased to 3.21 fold. Protease enzyme A3E3 had optimal activity at pH 6 and temperature of 60 0C. The enzyme had good stability at temperatures 40-60 0C and pH 4 – 7. Enzyme showed highest specificity on casein substrate followed by whey, gelatin, BSA, egg albumin, and soy protein. This enzyme had a KM value 0,042 mg. ml-1 and Vmax 2,33 mg. ml-1 .min-1. Enzyme activity increased with the addition of metal ions ZnCl2, FeCl2 and MgCl2. This enzyme is inhibited by the HgCl2 so can be categorized as a cysteine protease. Protease band detected in the zymogram were estimated at 156,23 kDa.

Item Type:	Thesis (Sarjana)
Identification Number:	SKR/FTP/2014/441/051406662
Subjects:	300 Social sciences > 338 Production > 338.1 Agriculture
Divisions:	Fakultas Teknologi Pertanian > Teknologi Hasil Pertanian
Depositing User:	Budi Wahyono Wahyono
Date Deposited:	20 Oct 2014 10:16
Last Modified:	11 Mar 2022 07:08
URI:	http://repository.ub.ac.id/id/eprint/149853

	Text COVER_SKRIPSI_AZMY_NAHDHIYATI_F_THP_FTP_UB.pdf Restricted to Registered users only Download (1MB)
	Text Halaman_Judul_Azmy_Nahdhiyati_F_THP_FTP_UB.pdf Restricted to Registered users only Download (1MB)
	Text SKRIPSI_AZMY_NAHDHIYATI_F_THP_FTP_UB.pdf Restricted to Registered users only Download (3MB)

Actions (login required)

View Item