Pengaruh Terapi Kombinasi Azacitidine dan Ekstrak Jamur Tiram (Pleurotus ostreatus) terhadap Ekspresi microRNA-29b dan Invasi Sel pada Sel Acute Myeloid Leukemia (AML) in vitro.

Ujianto, Michelle Anisa and Prof. Agustina Tri Endharti, S. Si., Ph.D and Drs. Sofy Permana, M.Sc., D.Sc. (2023) Pengaruh Terapi Kombinasi Azacitidine dan Ekstrak Jamur Tiram (Pleurotus ostreatus) terhadap Ekspresi microRNA-29b dan Invasi Sel pada Sel Acute Myeloid Leukemia (AML) in vitro. Magister thesis, Universitas Brawijaya.

Abstract

Leukemia Myeloid Akut (AML) merupakan bentuk leukemia yang sering terjadi di orang dewasa. Pada kejadian AML, tubuh menghasiIkan mieloblas imatur yang terlalu banyak, sehingga mengakibatkan ekspansi klonal mieloblas. Disregulasi miRNA yang luas ditemukan pada beberapa keganasan hematologis, termasuk Acute Myeloid Leukemia (AML) pada manusia. Beberapa penelitian memperlihatkan bahwa miRNA-29b dapat menurunkan proliferasi sel pada AML, meningkatkan apoptosis, dan menurunkan perkembangan leukemia in vivo. MiR-29b telah terbukti menghambat proliferasi myoblast dengan menargetkan AKT3 serta gen terkait proliferasi lainnya, p85a yang menyebabkan penghentian siklus sel pada tahap G0/G1 dan penurunan tingkat proliferasi yang signifikan. Semakin banyak bukti memperlihatkan bahwa miR-29b memainkan peran penting dalam metastasis dan invasi sel kanker. Peningkatan regulasi miR-29b menghambat metastasis pada sel kanker prostat dengan menargetkan molekul matriks pro-metastatik, termasuk Mcl-1, kolagen (COL)1A1, COL4A1, dan matriks metalloproteinase-2 (MMP-2). Dalam sebuah penelitian memperlihatkan bahwa ß-glukan menyebabkan apoptosis sel kanker dan dianggap sebagai agen terapeutik untuk melawan pertumbuhan tumor. Saat ini, agen hipometilasi yang disetujui di Amerika Serikat dan digunakan secara luas untuk pengobatan AML di Eropa dan di seluruh dunia adalah 5-azacitidine. Mekanisme kerja obat ini adalah menghambat DNA methyltransferase sehingga sintesis DNA terhambat dan berakhir dengan kematian sel. Indonesia adalah negara beriklim tropis yang mempunyai potensi untuk mengembangkan bahan baku obat dari sumber daya nya. Salah satunya adalah jenis jamur tertentu yang dapat dikembangkan sehingga dapat berkhasiat sebagai obat. PIeurotus ostreatus atau biasa dikenal sebagai jamur tiram memiliki polisakarida jamur yang paling penting yaitu keIompok beta glukan dengan konstituen aktifnya adalah ß-glukan. ß-glukan juga memiliki efek sitotoksik melalui stres oksidatif pada sel kanker prostat secara in vitro, menyebabkan apoptosis. Namun sejauh ini belum ada penelitian yang melaporkan aktivitas ß-glukan dari ekstrak Pleurotus ostreatus sebagai antikanker pada Acute Myeloid Leukemia (AML). Sehingga, penelitian ini dilangsungkan guna mengetahui pengaruh dari pengobatan kombinasi antara azacitidine serta Pleurotus ostreatus pada ekspresi microRNA-29b dan invasi sel pada Acute Myeoloid Leukemia (AML). Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah cell line HL-60 yang diperoleh dari ATCC CCL-240™. Prosedur pertama dari penelitian ini adalah ekstraksi beta glukan dari Pleorotus ostreatus menggunakan etanol 80%. Kemudian dilakukan kultur sel Acute Myeloid Leukemia (AML) dan ditambahkan kombinasi hasiI ekstraksi beta glukan dari Pleorotus ostreatus dan azacitidine, dengan pembagian keIompok perIakuan sebagai berikut: Tidak ada perIakuan (kontrol negatif); Pengobatan dengan azacitidine (kontrol positif); PerIakuan dengan azacitidine 10uM + ekstrak jamur tiram 0,5 mg/mL; Pemberian azacitidine 10uM + ekstrak jamur tiram 1 mg/mL; PerIakuan dengan azacitidine 10uM + ekstrak jamur tiram 2 mg/mL; Pemberian ekstrak jamur tiram 2 mg/mL. Setelah itu dilakukan prosedur isolasi RNA menggunakan mirVanaTM miRNA Isolation kit dan menggunakan miRCURY LNA RT Kit RNA diubah menjadi cDNA. Pengamatan ekspresi miRNA-29b dilakukan menggunakan RT-PCR dengan miRCURY LNA SYBRR Green PCR Kit dan primer spesifik yang telah dirancang. Sedangkan pengamatan invasi sel dilakukan dengan Transwell-cell invasion assay, data kemudian dianalisis menggunakan uji One Way ANOVA dan didapatkan hasil pemberian ekstrak jamur tiram (Pleurotus ostreatus) sebagai terapi kombinasi azacitidine mampu meningkatkan ekspresi miRNA-29b dan menurunkan invasi sel pada sel AML (HL-60) secara in vitro lebih tinggi dibandingkan dengan terapi tunggal.

English Abstract

Acute Myeloid Leukemia (AML) is the most common type of acute leukemia found in adults. In most cases of AML the body produces too many immature myeloblasts, resulting in clonal expansion of myeloblasts. Extensive miRNA dysregulation is found in several haematological malignancies, including acute myeloid leukemia (AML) in humans. Several studies have shown that miRNA-29b can decrease cell proliferation in AML, increase apoptosis, and decrease leukemia progression in vivo. MiR-29b has been shown to inhibit myoblast proliferation by targeting AKT3 as well as another proliferation-associated gene, p85a which causes cell cycle arrest at the G0/G1 stage and a significant reduction in proliferation rate. In a study showed that ß-glucan causes apoptosis of cancer cells and is considered a therapeutic agent to fight tumor growth. Currently, the hypomethylating agent approved in the United States and widely used for the treatment of AML in Europe and worldwide is 5-azacitidine. The mechanism of action of this drug is to inhibit DNA methyltransferase so that DNA synthesis is inhibited and ends with cell death. Indonesia is a tropical country with potential resources for the development of medicinal raw materials. One of them is the development of several types of mushrooms that are efficacious as medicine. Pleurotus ostreatus or commonly known as oyster mushroom is a wood fungus that grows sideways on rotting wood trunks. One of the most important forms of fungal polysaccharides is the beta glucan group with the active constituent being ß-glucan. ß-glucan also has a cytotoxic effect through oxidative stress on prostate cancer cells in vitro, causing apoptosis. However, so far there has been no study reporting the activity of ß-glucan from Pleurotus ostreatus extract as anti-cancer in Acute Myeloid Leukemia (AML). So, the purpose of this research is to prove the effect of the combination of azacitidine and Pleurotus ostreatus extract on miRNA-29b expression and apoptosis in Acute Myeoloid Leukemia (AML). This research is an in vitro experimental research and the sample used in this study is HL- 60 cell line obtained from the ATCC CCL-240™. The first procedure of this research is extraction of beta glucan from Pleorotus ostreatus using 80% ethanol. Then, Acute Myeloid Leukemia (AML) cell line culture is performed and the combined results of the extraction of beta glucan from Pleorotus ostreatus and azacitidine were added, with the distribution of treatment groups as follows: No treatment (negative control); Treatment with azacitidine (positive control); Treatment with azacitidine 10uM + oyster mushroom extract 0,5 mg/mL; Administration of azacitidine 10uM + oyster mushroom extract 1 mg/mL; Treatment with azacitidine 10uM + oyster mushroom extract 2 mg/mL; Treatment with oyster mushroom extract 2 mg/mL. After that, the RNA isolation procedure is performed using mirVanaTM miRNA Isolation kit and using the miRCURY LNA RT Kit the RNA is being changed to cDNA. The Observation of miRNA-29b expression is conducted using Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR) with the miRCURY LNA SYBRR Green PCR Kit and specific primer that has been designed. Whereas, the apoptosis observation is conducted using Acrydine Orange immunofluorescence. Then the differences between treatment groups are analyzed using the One Way ANOVA test and it was found that giving oyster mushroom extract (Pleurotus ostreatus) as azacitidine combination therapy was able to increase miRNA-29b expression and reduce cell invasion in AML cells (HL-60) in vitro higher than single therapy.

Item Type:	Thesis (Magister)
Identification Number:	0423060075
Subjects:	600 Technology (Applied sciences) > 616 Diseases > 616.02 Special topics of disease > 616.025 Medical emergencies / Emergency medicine / Emergency nursing / Triage (Medicine)
Divisions:	S2/S3 > Magister Ilmu Biomedis, Fakultas Kedokteran
Depositing User:	Endang Susworini
Date Deposited:	05 Dec 2023 06:26
Last Modified:	05 Dec 2023 06:26
URI:	http://repository.ub.ac.id/id/eprint/204829

Text (DALAM MASA MEMBARGO) Michelle Anisa Ujianto.pdf Restricted to Registered users only until 31 December 2025. Download (12MB)

Actions (login required)

View Item