Studi Imunogenitas Protein Rekombinan Human Zp3 Dan Karakterisasi Monoklonal Antibodi Rekombinan Human Zona Pelusida 3 (Mab Rek-Hzp3) Sebagai Kandidat Imunokontrasepsi Wanita

Mubarakati, NurulJadid (2016) Studi Imunogenitas Protein Rekombinan Human Zp3 Dan Karakterisasi Monoklonal Antibodi Rekombinan Human Zona Pelusida 3 (Mab Rek-Hzp3) Sebagai Kandidat Imunokontrasepsi Wanita. Doctor thesis, Universitas Brawijaya.

Abstract

Vaksin imunokontrasepsi wanita bertujuan menciptakan masyarakat yang berkualitas dan menjadi salah satu metode untuk mengurangi peningkatan populasi penduduk. Mekanisme kerja vaksin imunokontrasepsi ini melibatkan sistem kekebalan tubuh dengan menggunakan antibodi terhadap protein yang berperan dalam proses fertilisasi sehingga fertilisasi akan terhambat. ZP3 berperan dalam proses fertilisasi dan terbukti dalam beberapa penelitian bersifat imunogenik. Antibodi poliklonal terbukti menghambat fertilisasi secara in vivo, namun belum memiliki spesifitas yang cukup baik sehingga dalam studi ini menjadi sangat penting untuk meningkatkan kualitas antibodi dengan memproduksi monoklonal antibodi terhadap rekombinan hZP3 (Mab rek hZP3). Mab rek hZP3 yang dipelajari dalam penelitian ini diharapkan mampu mengenali satu antigenic site pada satu epitop dari serangkaian molekul ZP3. Secara umum penelitian ini mempelajari monoklonal antibodi rek hZP3 untuk pengembangan imunokontrasepsi wanita. Penelitian ini dilaksanakan dalam 4 tahap, yaitu (1) prediksi glycan site dan conserve region gen penyandi human zona pelusida 3 secara in silico, (2) karakterisasi protein rekombinan hZP3, (3) produksi dan karakterisasi Mab rek hZP3 serta (4) prediksi hasil moleculer docking pada conserve regiongen ZP3 dengan ADAM 2 spermatozoa secara in silico. Hasil penelitian pada tahap pertama menunjukkan bahwa hasil produk PCR pada klon pET28a-hZP3 memiliki satu pita yaitu 122 bp. Gen hZP3 terinsert ke dalam plasmid pET-28a secara sempurna. Analisis sekuensing menunjukkan vii bahwa terdapat kesamaan sekuen asam amino pada manusia sebelum dan sesudah kloning yaitu pada sekuen SQWSRSASRNRR dimana mempunyai 12 asam amino dari posisi 341-352 aa. Sekuen ini memiliki glycans site (Asn-X-Thr/Ser) yang berperan dalam pengikatan dengan spermatozoa. Conserved region pada gen ZP3 memiliki tiga daerah (CR 1, CR2 dan CR3) dimana bersifat homolog dengan beberapa spesies mamalia yaitu manusia, kuda dan hamster. Pada penelitian tahap kedua, berdasarkan analisis Western Blotting, protein rekombinan ZP3 manusia memiliki berat molekul 79 kDa. Poliklonal antibodi rek hZP3 dapat mengenali antigennya juga mengenali protein lain yaitu dengan berat molekul 37 kDa. Hasil uji reaksi silang menunjukkan bahwa protein rek hZP3 dapat dikenali oleh antibodi ZP3 pada sapi. Uji imunogenisitas dengan menggunakan tehnik ELISA, menunjukkan bahwa pada bleeding ke-3 dan 8 terjadi peningkatan titer antibodi terhadap protein rekombinan hZP3. Peningkatan titer antibodi dapat disebabkan oleh adanya respon sekunder melalui booster, sehingga menyebabkan proliferasi sel memori berlangsung secara cepat dan dibentuk antibodi yang lebih banyak dengan kurun waktu yang lebih lama. Pada tahap ketiga, monoklonal antibodi rek hZP3 secara spesifik mengenali protein rekombinan hZP3 melalui metode ELISA dan Western Blotting. Sedangkan pada tahap keempat bertujuan untuk membuktikan adanya hambatan Mab rek hZP3 pada proses fertilisasi yang diuji secara in silico dengan cara mereaksikan conserved region(CR) gen ZP3 dengan molekul A disintegrin and metalloproteinase (ADAM 2). Berdasarkan hasil docking tersebut, Mab rek hZP3 diprediksi dapat mengenali CR1 pada gen ZP3 dengan global energy yang sama besar dengan CR1 dan ADAM2. Hasil analisis docking moleculer menunjukkan bahwa asam amino protein Pro 143 dan Tyr 142 pada ZP3 terglikosilasi merupakan active site yang dapat diikat oleh Mab rek hZP3 sehingga harapannya fertilisasi terhambat.

Item Type: Thesis (Doctor)
Identification Number: DIS/616.079 8/MUB/s/2016/061611492
Subjects: 600 Technology (Applied sciences) > 616 Diseases
Divisions: S2/S3 > Doktor Biologi, Fakultas MIPA
Depositing User: Nur Cholis
Date Deposited: 11 Apr 2017 13:29
Last Modified: 11 Apr 2017 13:29
URI: http://repository.ub.ac.id/id/eprint/160522
Full text not available from this repository.

Actions (login required)

View Item View Item