Kurniawan, Dedy (2011) Karakterisasi Antibodi Monoklonal terhadap bZP3 (Mab–bZP3) untuk Pengembangan Imunokontrasepsi Wanita. Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Laju pertumbuhan penduduk Indonesia saat ini sudah memasuki tahap yang sangat menghawatirkan yang menyebabkan banyak masalah kependudukan seperti menigkatnya angka penganguran, kemiskinan dan kriminalitas. Salah satu upaya pemerintah yang dilakukan untuk mengatasi hal ini adalah program keluarga berencana. Salah satu bagian dari program keluarga berencana adalah penggunaan kontrasepsi, namun hal ini kurang efektif karena banyak efek samping yang ditimbulkan. Sehingga banyak dikembangkan metode kontrasepsi alternatif salah satunya imunokontrasepsi. Imunokontrasepsi merupakan penghambatan fertilisasi melalui proses immunologis. Pengembangan imunokontrasepsi pada wanita banyak dikembangkan dengan menggunakan antibodi terhadap protein zona pellusida diantaranya b ZP3. Pemilihan ZP3 dikarenakan protein ini merupakan reseptor utama dalam proses fertilisasi. Selama ini antibodi yang digunakan masih berupa antibodi poliklonal yang memiliki spesifitas yang kurang sehingga perlu diupayakan peningkatan kualitas antibodi dengan penggunaan antibodi monoklonal. Dalam penelitian ini bertujuan meningkatkan kualitas antibodi terhadap b ZP3 dengan memproduksi dan mengkarakterisasi antibodi monoklonal terhadap b ZP3 ( Mab–b ZP3). Penelitian ini terdiri dari tiga tahapan penelitian yaitu Tahap1. Koleksi dan produksi b ZP3 dimana oosit dipecah dengan fine pipet kemudian isolat b ZP diisolasi dengan metode elektroelusi. Tahap2 Produksi antibodi Monoklonal terhadap b ZP3 ( Mab- bZP3) menggunakan teknik hibridoma. Tahap3 Karakterisasi antibodi Monoklonal terhadap b ZP3 ( Mab-b ZP3) menggunakan metode ELISA, Dot Blotting , Western Blotting , Imunohistokimia, dan uji pengikatan reseptor spermatozoa. Hasil penelitian menunjukkan terdapat perbedaan karakter antibodi monoklonal terhadap b ZP3 ( Mab-b ZP3) yang disintesis oleh sel hibridoma dengan cairan ascites. Dimana Mab-b ZP3 yang disintesis cairan ascites memiliki titer lebih tinggi dengan nilai absorbansi sebesar 0,042 dibandingkan dengan Mab-b ZP3 yang disintesis oleh sel hibridoma dengan nilai absorbansi sebesar 0,038. Mab-b ZP3 dari cairan ascites memiliki spesifitas yang lebih tinggi dan dapat mengenali molekul b ZP3 sampai pengenceran 1:5000 sedangkan sintesis sel hibridoma hanya dapat mengenali sampai pengenceran 1:2500 melalui uji imunobloting. Berdasarkan hasil Western blotting terlihat bahwa antibodi monoklonal yang diproduksi pada penelitian ini memiliki spesifitas yang tinggi terbukti hanya mengenali molekul b ZP3. Antibodi monoklonal terhadap b ZP3 ( Mab-b ZP3) dapat mengenali oosit spesies mamalia lainnya dalam hal ini oosit kambing. Antibodi monoklonal terhadap b ZP3 ( Mab-b ZP3) dapat menghambat interaksi antara b ZP3 dengan reseptor pada spermatozoa melalui uji pengkiatan reseptor spermatozoa.
English Abstract
rate of population growth in Indonesia is now entering an alarming stage, that causes many problems such as unemployment rates, poverty and crime One of Governments efforts to overcome this family planning programme. One part of family planning program is use of contraception, but is less effective because many side effects. So many alternative contraceptive methods developed one of immunocontraception. Immunocontraception is inhibiting fertilization through immunologis process. development of immunocontraception in women has been developed using antibodies against pellusida zone proteins such as b ZP3. ZP3 election because this protein is a key receptor in process of fertilization. During this antibody used was polyclonal antibody that has less specificity, is needed to improve quality of antibody by using monoclonal antibodies. This study aims to improve quality of antibodies against b ZP3 for production and characterizes of monoclonal antibodies against b ZP3 ( Mab - b ZP3). This study consists of three stages: Stage 1. Collection and production of b ZP3, defective oocytes b ZP with fine pipette and n isolates were isolated by electroelution method. Phase 2 Production of monoclonal antibodies against b ZP3 ( Mab-b ZP3) using hybridoma technique. Stage 3 characterization of monoclonal antibodies against b ZP3 ( Mab-b ZP3) using ELISA, Dot Blotting , Western Blotting , Immunohistochemistry, and test receptor binding of spermatozoa. results showed that re were differences in production of antibodies monoclonal against b ZP3 ( Mab-b ZP3) are syn sized by hybridoma cells with ascites fluid. Mab-syn sized b ZP3 ascites fluid has a titer of 0.042 absorbance value higher than Mab-b ZP3 syn sized by hybridoma cells with absorbance value of 0.038. Mab-b ZP3 of ascites fluid has a greater specificity and can recognize up to dilution 1 : 5000 b ZP3, syn sis of molecule hybridoma cells can only recognize until 1: 2500 while dilution by immuno-blotting test. Based on results of Western blotting showed that monoclonal antibodies produced in this study had high specificity has been recognized only b ZP3 molecules. Antibody monoclonal against bZP3 ( Mab-b ZP3) to identify o r oocytes species of mammals here goat oocyte. Antibody monoclonal against b ZP3 ( Mab-b ZP3) can inhibit interaction between b ZP3 with recipients in sperm through sperm receptor binding test.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/616.079 8/KUR/k/041100729 |
| Subjects: | 600 Technology (Applied sciences) > 616 Diseases |
| Divisions: | S2/S3 > Magister Matematika, Fakultas MIPA |
| Depositing User: | Endro Setyobudi |
| Date Deposited: | 15 Mar 2011 14:55 |
| Last Modified: | 15 Mar 2011 14:55 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/158261 |
Actions (login required)
 |
View Item |