Dluha, Nurul (2016) Upaya Produksi Glutathion Melalui Insersi Gen Gshi Dan Stimulasi Albumin Ikan Pada Saccharomyces Cerevisiae. Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Glutathion merupakan senyawa tripeptida yang memiliki kemampuan sebagai antioksidan yang dapat memproteksi sel dari stress oksidatif. Glutathion juga berperan sebagai penguat sistem imun, agen detoksifikasi dan regulator proliferasi sel. Glutathion tidak hanya digunakan pada dunia medis tetapi juga digunakan sebagai zat aditif pada makanan dan industri kosmetik. Hal tersebut mengakibatkan meningkatnya permintaan glutathion setiap tahunnya. Permintaan akan glutathion tidak diikuti dengan ketersediaan glutathion yang cukup. Tingginya biaya produksi dapat menjadi salah satu penyebab masalah tersebut. Produksi glutathion memerlukan medium optimum, tambahan asam amino, dan ATP yang tinggi. Sumber alternatif medium, asam amino, dan organisme yang digunakan untuk produksi glutathion dapat menjadi salah satu solusi dalam menekan biaya produksi glutathion. Penyisipan gen gshI dan penambahan asam amino merupakan salah satu upaya produksi glutathion pada S. cerevisiae. Gen gshI merupakan gen pengkode ɤglutamilsistein sintetase (GSHI) yang merupakan faktor pembatas dari sintesis glutathion. Asam amino yang ditambahkan merupakan asam amino esensial dalam sintesis glutathion yaitu, glutamat, glisin dan sistein. Penambahan asam amino dapat meningkatkan biaya produksi sehingga memerlukan adanya sumber alternatif. Albumin ikan dapat dijadikan sebagai sumber alternatif asam amino, karena mengandung glutamat, glisin dan sistein. Penelitian ini bertujuan untuk memproduksi glutathion melalui penyisipan gen gshI dan stimulasi albumin ikan pada S. cerevisiae. Konstruksi plasmid dilakukan dengan program SnapGene™ version 1.1.3, kemudian dilakukan pemesanan plasmid di Genscript. Plasmid yang digunakan merupakan plasmid pESC-TRP dengan Promoter GAL 1 yang aktivasinya diinduksi dengan galaktosa yang berasal dari ekstrak buah pepaya. Plasmid tersebut kemudian ditransformasikan ke S. cerevisiae dengan menggunakan metode elektroforasi. Selanjutnya dilakukan seleksi koloni pada media trp-drop out. Plasmid diisolasi dari koloni positif yang tumbuh dan direstriksi untuk mengkonfirmasi penyisipan plasmid. Kurva pertumbuhan S. cerevisiae digunakan untuk mengetahui waktu atau timeline penambahan albumin ikan, dan waktu pemanenan glutathion. Media yang digunakan terdiri dari 1 % yeast ekstrak, 0,04 % ekstrak kaldu, dan 0,26 % ekstrak pepaya. Albumin ikan ditambahkan pada akhir fase logaritmik dan awal fase stasioner. Kurva standar glutathion dibuat dengan menggunakan metode DTNB dan absorbansi diukur pada λ 405 nm . Inokulum diukur absorbansinya hingga mencapai OD600= 0,6 kemudian sebanyak 10% dari volume media diinkubasi di dalam shaker incubator pada kecepatan 200 rpm dan suhu 30 °C. Kultur dipanen pada jam ke-36 dan ke-44. Percobaan yang dilakukan menggunakan rancangan faktorial dengan tiga kali ulangan. Data dianalisis menggunakan one way ANOVA (ρvalue ≤ 0.05) dan dilanjutkan dengan uji Duncan. Analisis statistika menggunakan program Windows SPSS software version 17.0. Penyisipan gen gshI belum berhasil. Hal tersebut dibuktikan dengan ketidaksesuaian ukuran pita pada gel agarosa dengan hasil dari Genscript, selain itu tidak terjadi pemotongan pada plasmid hasil isolasi yang direstriksi dengan XbaI dan EcoRI. Berdasarkan hasil analisis statistika, penambahan albumin ikan memiliki pengaruh yang signifikan dalam produksi glutathion. Konsentrasi viii albumin ikan yang optimal dalam meningkatkan produksi glutathion adalah konsentrasi 5 mg/mL, dengan peningkatan glutathion sebesar 36,36 % dibandingkan dengan kontrol. Jika dibandingkan dengan jam ke-36, pemanenan pada jam ke-44 merupakan waktu optimal pemanenan glutathion, meskipun tidak berbeda nyata.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/572.65/DLU/u/2016/041611363 |
| Subjects: | 500 Natural sciences and mathematics > 572 Biochemistry > 572.6 Proteins |
| Divisions: | S2/S3 > Magister Biologi, Fakultas MIPA |
| Depositing User: | Nur Cholis |
| Date Deposited: | 08 May 2017 10:42 |
| Last Modified: | 08 May 2017 10:42 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/157682 |
Actions (login required)
 |
View Item |