Amin, MuhammadHilmanFu`adil (2011) Studi Potensi Inhibin B sebagai Kandidat Kontrasepsi Pria Berdasarkan Kualitas Spermatozoa, Ekspresi cAMP Response Element Modulator (CREM) dalam Testis dan Kadar Luteinizing Hormone (LH) dalam Serum. Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Jumlah penduduk yang besar, selain menjadi modal bagi pembangunan negara juga sebaliknya menjadi masalah dan beban bagi negara. Salah satu upaya untuk mengendalikan peningkatan jumlah penduduk adalah dengan kontrasepsi. Pria seharusnya juga memiliki beban yang sama dalam perencanaan keluarga, sehingga metode kontrasepsi pria perlu dikembangkan. Salah satu target kontrasepsi pria adalah mengganggu produksi spermatozoa yang diregulasi oleh FSH dan LH. FSH diperlukan untuk produksi dan perkembangan gamet pada fase fertil kehidupan. Sekresi dan produksi FSH oleh kelenjar pituitari pada pria diregulasi oleh inhibin B yang diproduksi oleh sel Sertoli dalam testis. Inhibin B merupakan hormon polipeptida yang secara selektif menghambat sekresi FSH melalui mekanisme feedback negatif, sehingga inhibin B memiliki potensi dijadikan salah satu kandidat kontrasepsi pria. Salah satu syarat kontrasepsi pria adalah tidak mempengaruhi maskulinitas dan libido yang diregulasi oleh testosterone-LH. Pathway signaling utama FSH dalam sel Sertoli adalah jalur cAMP-PKA yang meregulasi faktor transkripsi CREM. CREM merupakan faktor transkripsi yang berperan penting pada spermatogenesis. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui peran isolat inhibin B dari hasil kultur primer testis terhadap kualitas spermatozoa, ekspresi CREM pada jaringan testis dan kadar hormon LH dalam serum tikus ( Rattus norvegicus ) strain Wistar. Kualitas spermatozoa didasarkan pada motilitas, viabilitas dan konsentrasi spermatozoa. Prosedur penelitian secara garis besar dibagi menjadi dua, yaitu (1) produksi inhibin B, meliputi kultur primer testis Rattus norvegicus , isolasi crude protein hasil kultur primer testis tikus, separasi crude protein hasil kultur primer testis melalui native PAGE, uji spesifisitas dengan western blotting , dan pengukuran kadar inhibin B dengan ELISA; (2) perlakuan hewan coba dan pengujian potensi inhibin B sebagai kandidat kontrasepsi meliputi injeksi isolat inhibin B ke tikus, uji kualitas spermatozoa, pengukuran kadar LH dalam serum melalui metode ELISA, uji keberadaan ekspresi CREM dengan imunohistokimia. Data ekspresi CREM dalam jaringan testis dianalisis secara deskriptif,sedangkan konsentrasi spermatozoa, motilitas spermatozoa, viabilitas spermatozoa dan kadar LH dianalisis dengan mengunakan uji ANOVA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa inhibin B dari kultur primer testis tikus memiliki berat molekul 28 dan 30 kDa berdasarkan hasil western blotting dengan antibodi anti-rat inhibin βB. Ekspresi CREM pada sel-sel interstitial masih terdeteksi secara nyata pada kelompok yang diperlakukan pemberian inhibin B tetapi ekspresi CREM pada tubulus seminiferus mengalami penurunan. Seluruh kelompok perlakuan yang diberi inhibin B menunjukkan penurunan konsentrasi, motilitas dan viabilitas spermatozoa yang signifikan (P 0,05) dibanding dengan kelompok kontrol. Konsentrasi spermatozoa pada kelompok K I, K II dan K III masing-masing adalah 3,54 ± 0,05, 3,44 ± 0,08 dan 3,15 ± 0,09 juta/mL dan lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol (K0) (3,7 ± 0,05 juta/ mL). Motilitas spermatozoa pada kelompok K I, K II dan K III masing-masing adalah 44,83% ± 1,35, 39,5% ±1,75 dan 30,5% ± 1,43 dan lebih rendah dari pada kelompok kontrol (69,17% ± 0,94). Viabilitas spermatozoa pada kelompok K I, K II dan K III masing-masing adalah 46,33% ± 1,14, 40,83% ±1,58 dan 26,66% ± 1,33 dan lebih rendah dari pada kelompok control (70,5% ± 3,05). Kadar LH dalam serum tikus setelah dilakukan pemberian inhibin B menunjukkan tidak terdapat perbedaan signifikan (P 0,05) antara kelompok Kontrol dengan kelompok yang diberi inhibin B. Berdasarkan hasil tersebut, dapat diambil kesimpulan bahwa inhibin B memiliki potensi sebagai kandidat kontrasepsi pria karena mampu menginduksi penurunan kualitas spermatozoa dan ekpresi CREM pada testis, selain itu juga tidak berdampak terhadap testosteron dan LH yang meregulasi maskulinitas dan libido.
English Abstract
Large population, in addition to being capital for the countrys development is also contrary to the problem and burden for the country. One effort to control increasing population is contraception. Men should also have the same burden in family planning, so that male contraceptive methods should be developed. One of targets of male contraception is disturbing production of spermatozoa which is regulated by FSH and LH. FSH is required for production and development of gametes in fertile phase of life. Secretion and production of FSH by pituitary gland in males is regulated by inhibin B, which produced by Sertoli cells in testis. Inhibin B is a polypeptide hormone that selectively inhibits FSH secretion via negative feedback mechanism, so that inhibin B has potential as one of candidates for male contraception. Free of side effects and especially without influence on masculinity and libido was required in an ideal male contraceptive method. The main signaling pathway of FSH in Sertoli cells is cAMP-PKA pathway that regulate the transcription factor CREM. CREM is a transcription factor that plays an important role in spermatogenesis. The purpose of this study was to determine the role of inhibin B isolate from testis primary culture in quality of spermatozoa, expression of CREM in testis tissue and levels of serum LH in rats ( Rattus norvegicus ) strain Wistar. The quality of spermatozoa based on motility, viability and concentration of spermatozoa. Research procedures divided into two stage, (1) production and characterization of inhibin B, includes testis primary culture of Rattus norvegicus , isolation of crude protein from rat testis primary culture, separation of the crude protein by native PAGE, test specificity by western blotting, and inhibin B levels measured by ELISA, (2) treatment of animals model and test potency of inhibin B as a candidate male contraceptive include inhibin B isolates administration into rat, sperm quality test, measurement of serum LH levels by ELISA method, test CREM expression by immunohistochemistry. Data expression of CREM in testis tissue was analyzed by descriptive analysis, whereas sperm concentration, sperm motility, sperm viability and LH levels were analyzed using ANOVA. The results showed that inhibin B from primary culture of rat testis has a molecular weight of 28 and 30 kDa based on result of western blotting with antibodies anti-rat inhibin βB. CREM expression in treated group of inhibin B was detected in interstitial cells but CREM expression in the tubuli seminiferous decreased. All treated group of inhibin B showed a significant decrease (P 0.05) of concentration, sperm motility and viability compared with control. Concentration of spermatozoa in group of K I, K II and K III, respectively, 3.54 ± 0.05, 3.44 ± 0.08 and 3.15 ± 0.09 million / mL and lower than control (K0) (3.7 ± 0.05 million/mL). Motility of spermatozoa in group of K I, K II and K III, respectively 44.83% ± 1.35, 39.5% and 30.5% ± 1.75 ± 1.43 and lower than control (69,17% ± 0.94). Viability of spermatozoa in group of K I, K II and K III, respectively 46.33% ± 1.14, 40.83% ± 1.58 and 26.66% ± 1.33 and lower than control (70,5% ± 3.05). Serum LH levels in rats after administration of inhibin B showed no significant differences (P 0.05) between control and treated group. Based on these results, it can be concluded that inhibin B has potential as a candidate male contraception because it can induce the decrease in sperm quality and expression of CREM in testis, but it also had no impact on LH that regulate masculinity and libido.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/571.74/AMI/s/041100740 |
| Subjects: | 500 Natural sciences and mathematics > 571 Physiology and related subjects > 571.7 Biological control and secretions |
| Divisions: | S2/S3 > Magister Matematika, Fakultas MIPA |
| Depositing User: | Endro Setyobudi |
| Date Deposited: | 05 Oct 2011 15:14 |
| Last Modified: | 05 Oct 2011 15:14 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/157645 |
Actions (login required)
 |
View Item |