Aisyah, Diana (2017) Penggunaan Promoter Β-Aktin Ikan Mas (Cyprinus Carpio Β-Actin) Pada Transgenesis Ikan Koi (Cyprinus Carpio Var. Koi) Dengan Metode Elektroporasi Sperma. Magister thesis, Universitas Brawijaya.
Abstract
Teknologi transgenesis merupakan salah satu metode yang dapat digunakan untuk perbaikan mutu ikan. Teknologi ini mulai diterapkan untuk pengembangan akuakultur yang ada di Indonesia. Transgenesis dapat menghasilkan ikan transgenik yang mempunyai beberapa keunggulan antara lain peningkatan laju pertumbuhan dan laju pemanfaatan pakan (Kobayashi et al., 2007), peningkatan kemampuan ikan resisten terhadap penyakit (Sarmasik, 2003), dan pembuatan ikan strain yang baru (Gong et al., 2003). Salah satu metode transgenesis yang banyak digunakan yaitu metode elektroporasi pada sperma. Dimana menurut (Lavitrano, et al., 2006), sperma dapat digunakan sebagai media transfer gen. Metode elektroporasi dapat menyebabkan terbentuknya pori-pori temporal pada permukaan membran sel sehingga dapat membantu DNA eksogen masuk kedalam sel. Sedangkan efisiensi dalam proses transfer DNA dipengeruhi oleh tegangan dan lama kejutan (Symond, et al., 1994). Dalam hal ini, yang berperan penting dalam pengaturan ekspresi gen ditentukan oleh elemen regulator yaitu promoter. Promoter merupakan suatu sekuen DNA yang menentukan tempat, waktu dan tingkat ekspresi gen (Beaumont and Hoare, 2003). β-aktin berupakan salah satu jenis promoter yang bersifat ubiquitous yaitu aktif dimana-mana (Hackett, 1993). Promoter homolog dan promoter heterolog memiliki efektifitas yang berbeda. Oleh karena itu dilakukan uji terhadap promoter β- aktin dari ikan mas (homolog) terhadap ikan Koi untuk mengetahui promoter yang sesuai dengan inang yang akan dibuat menjadi transgenik. Efektifitas promoter dapat terlihat apabila disambungkan dengan gen target. Gen target yang digunakan dalam penelitian ini adalah Green Fluorescent Protein (GFP) yang berperan sebagai marker atau gen penanda (Iyengar et al., 1996).. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui efektifitas konsentrasi promoter homolog dari β-aktin ikan Mas dalam mengekpresikan gen marker GFP (green fluorescent protein) pada proses transgenesis ikan Koi dengan menggunakan metode elektroporasi dan SMGT (Sperm mediated gene transfer) pada sperma, embrio dan larva dari ikan Koi. Metode penelitian yang digunakan adalah metode eksperimen dengan Rancangan Acak Lengkap dengan 3 macam konsentrasi ccβAGFP sebesar 10 ng/μl, 30 ng/μl dan 50 ng/μl. Perlakuan elektroporasi dengan menggunakan tegangan listrik/voltage sebesar 30 volt dan jumlah kejutan sebanyak 4 kali. Parameter yang diamati meliputi : Pendaran dan daerah integrase ccBA-GFP pada sperma, telur dan larva, teridentifikasi atau tidaknya GFP pada embrio dan larva, motilitas sperma, viabilitas sperma, daya fertilitas dan derajat penetasan telur. Hasil penggunaan promoter ccBA (Cyprinus carpio β-actin) dapat mengekpresikan pendaran gen marker GFP pada sperma, embrio dan larva ikan Koi dengan konsentrasi terbaik sebesar 10 ng/μl.
English Abstract
Transgenic technology is one method that can be used to improve fish quality. This technology has been applied to develop fish aquaculture in Indonesia. Transgenic technology can produce transgenic fish that have several advantages such as increased growth rate and feed utilization rate (Kobayashi et al., 2007), increased ability of disease-resistant fish (Sarmasik, 2003), and the manufacture of new strain of fish (Gong et al., 2003). One of the most widely used methods of transgenic was electroporation method in sperm. Where according to (Lavitrano, et al., 2006), sperm can be used as a gene transfer medium. The electroporation method can cause the formation of temporal pores on the surface of the cell membrane so as to help exogenous DNA enter the cell. While the transfer efficiency of DNA process is adhered to by voltage and shock duration (Symond, et al., 1994). In this case, an important role in the regulation of gene expression was determined by promoter as the regulator element. Promoter is sequence of DNA that determines the place, time and level of gene expression (Beaumont and Hoare, 2003). β-actin promoter represents one type of ubiquitous promoter that is active everywhere (Hackett, 1993). Homologue promoters and heterologous promoters have different effectiveness. Therefore, a test of β-actin-promoter from carp (homologous) to Koi fish was done to find out the promoter which is suitable with host to be made into transgenic. The effectiveness of the promoter can be seen when connected to the target genes. The target gene used in this study was Green Fluorescent Protein (GFP) which acts as a marker gene (Iyengar et al., 1996). The purpose of this study was to determine the effectiveness of homologous promoter concentration of β-actin of Cyprinus carpio fish in expression of GFP (green fluorescent protein) marker gene on Koi fish transgenic process using electroporation method and SMGT (Sperm mediated gene transfer) on sperm, embryo and larva from fish Koi. The research method used was experimental method with Completely Randomized Design with 3 kinds of ccβA-GFP concentration of 10 ng/μl, 30 ng/ μl and 50 ng/μl. Electroporation treatment on sperm used voltage level 30 volts and pulse number 4 times. Parameters observed included: Luminescence and ccBA-GFP integrase areas in sperm, egg and larvae, identified or not GFP in embryo and larvae, sperm motility, sperm viability, fertilization rate and hatching rate. The results showed of ccBA promoter (Cyprinus carpio β-actin) can express GFP marker gene in sperm, embryo and Koi fish larvae with the best concentration of 10 ng / μl.
| Item Type: | Thesis (Magister) |
|---|---|
| Identification Number: | TES/660.65/AIS/p/2017/041707121 |
| Uncontrolled Keywords: | TRANSGENIC ANIMALS, ANIMAL GENETIC ENGINEERING, ANIMAL BIOTECHNOLOGY, CYPRINUS, ELECTROPORATION, ACTIA |
| Subjects: | 600 Technology (Applied sciences) > 660 Chemical engineering and related technologies > 660.6 Biotechnology > 660.65 Genetic engineering |
| Divisions: | S2/S3 > Magister Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan |
| Depositing User: | Nur Cholis |
| Date Deposited: | 18 Aug 2017 01:45 |
| Last Modified: | 14 Dec 2020 04:44 |
| URI: | http://repository.ub.ac.id/id/eprint/1421 |
![[thumbnail of BAGIAN DEPAN.pdf]](http://repository.ub.ac.id/style/images/fileicons/text.png) |
Text
BAGIAN DEPAN.pdf Restricted to Repository staff only Download (74kB) |
|
Text
1. BAB I TESIS DIANA AISYAH(1).pdf Restricted to Repository staff only Download (29kB) |
|
Text
2. BAB II TESIS DIANA AISYAH(2).pdf Restricted to Repository staff only Download (81kB) |
|
Text
3. BAB III TESIS DIANA AISYAH.pdf Restricted to Repository staff only Download (284kB) |
|
Text
4. BAB IV TESIS DIANA AISYAH.pdf Restricted to Repository staff only Download (217kB) |
|
Text
5. BAB V TESIS DIANA AISYAH.pdf Restricted to Repository staff only Download (1MB) |
|
Text
6. BAB VI PENUTUP.pdf Restricted to Repository staff only Download (80kB) |
|
Text
7. DAFTAR PUSTAKA.pdf Restricted to Repository staff only Download (240kB) |
Actions (login required)
 |
View Item |